{"id":2809,"date":"2026-07-26T08:57:21","date_gmt":"2026-07-26T07:57:21","guid":{"rendered":"https:\/\/seamlessbio.de\/?page_id=2809"},"modified":"2026-07-26T08:57:56","modified_gmt":"2026-07-26T07:57:56","slug":"vesicle-assay-vs-cell-based-assay-abc-transporter","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/vesicle-assay-vs-cell-based-assay-abc-transporter\/","title":{"rendered":"Vesikel-Assay vs. zellbasierter Assay"},"content":{"rendered":"<div data-elementor-type=\"wp-page\" data-elementor-id=\"2809\" class=\"elementor elementor-2809\" data-elementor-post-type=\"page\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-7ab4232 e-con e-atomic-element e-flexbox-base e-e832a9a\" data-id=\"7ab4232\" data-element_type=\"e-flexbox\" data-e-type=\"e-flexbox\" data-interaction-id=\"7ab4232\">\n    \t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-9420f23 elementor-widget elementor-widget-html\" data-id=\"9420f23\" data-element_type=\"widget\" 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oder zellbasierter Assay? \u2013 Auswahl eines Formats f\u00fcr Untersuchungen an ABC-Transportern<\/h1>\n    <p class=\"sub\">Beide Formate liefern Ihnen P-gp- und BCRP-Daten. Bei dem einen wird der Transporter isoliert, bei dem anderen verbleibt er in einer lebenden Barriere. Die passive Permeabilit\u00e4t entscheidet dar\u00fcber, welches der beiden Verfahren Ihre Frage tats\u00e4chlich beantworten wird.<\/p>\n    <div class=\"hbtn\">\n      <a class=\"btn\" href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/kontakt\/\">Angebot anfordern<\/a>\n      <a class=\"btn-o\" href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dmpk-abc-transporter-assays\/\">\u00dcberblick \u00fcber den DMPK-Assay<\/a>\n    <\/div>\n  <\/div>\n\n  <div class=\"answer\">\n    <strong class=\"lb\">Kurz gesagt<\/strong>\n    Verwendung <strong>Membranvesikel<\/strong> f\u00fcr Hemmungsstudien und eine fundierte IC<sub>50<\/sub> Werte \u2013 der Transporter ist isoliert, sodass das Ergebnis diesem zugeordnet werden kann. Verwenden Sie ein <strong>Zellmonoschicht<\/strong> um den Substratstatus zu bestimmen, insbesondere bei Verbindungen mit hoher passiver Permeabilit\u00e4t, bei denen eine Vesikel die Verbindung einfach nicht lange genug zur\u00fcckhalten kann, um sie zu messen.\n  <\/div>\n\n  <h2>Was die einzelnen Formate messen<\/h2>\n\n  <div class=\"split\">\n    <div class=\"box\">\n      <h3>Invertierte Membranvesikel<\/h3>\n      <p>Membranfragmente aus Zellen, die einen Transporter \u00fcberexprimieren, wurden so fixiert, dass die intrazellul\u00e4re Seite nach au\u00dfen zeigt. In dieser Ausrichtung pumpt der Transporter das Substrat <em>in<\/em> die Vesikel.<\/p>\n      <p>Man misst die Anreicherung im Vesikel, und zwar ATP-abh\u00e4ngig. Ein Transporter, kein Stoffwechsel, keine anderen Transportwege.<\/p>\n    <\/div>\n    <div class=\"box\">\n      <h3>Polarisierte Zellmonoschicht<\/h3>\n      <p>Caco-2-, MDCK-MDR1- oder eine vergleichbare transfizierte Zelllinie, die auf einem durchl\u00e4ssigen Tr\u00e4ger zu einer konfluenten Monoschicht herangez\u00fcchtet wurde, mit einem apikalen und einem basolateralen Kompartiment.<\/p>\n      <p>Man misst den Transport durch die Barriere in beide Richtungen und berechnet das Efflux-Verh\u00e4ltnis.<\/p>\n    <\/div>\n  <\/div>\n\n  <h3>Das Efflux-Verh\u00e4ltnis, kurz gesagt<\/h3>\n  <p>Die scheinbare Permeabilit\u00e4t wird in Richtung basolateral-apikal und apikal-basolateral gemessen. Das Verh\u00e4ltnis dieser beiden Werte ist das Efflux-Verh\u00e4ltnis. Ein deutlich \u00fcber eins liegendes Verh\u00e4ltnis, das bei Zugabe eines spezifischen Inhibitors sinkt, deutet auf einen aktiven Efflux hin \u2013 dies ist der Standardnachweis f\u00fcr den Substratstatus.<\/p>\n\n  <h2>Seite an Seite<\/h2>\n\n  <div class=\"tw\">\n    <table>\n      <thead><tr><th><\/th><th>Membranvesikel<\/th><th>Zellmonoschicht<\/th><\/tr><\/thead>\n      <tbody>\n        <tr><td><strong>Auslesung<\/strong><\/td><td>Anreicherung im Inneren der Vesikel<\/td><td>Ausstr\u00f6mungsverh\u00e4ltnis \u00fcber die Barriere hinweg<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Anwesende Transporter<\/strong><\/td><td>Eins<\/td><td>Das transfizierte Gen sowie das endogene Gen<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Zuschreibung der Wirkung<\/strong><\/td><td>Eindeutig<\/td><td>Erfordert Inhibitor-Kontrollen<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Stoffwechsel<\/strong><\/td><td>Keine<\/td><td>M\u00f6glich<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Passive Durchl\u00e4ssigkeit<\/strong><\/td><td>Wirkte sich nachteilig f\u00fcr dich aus<\/td><td>Teil der Messung<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Hemmung (IC<sub>50<\/sub>)<\/strong><\/td><td>Gut geeignet<\/td><td>M\u00f6glich, weniger sauber<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Substratbewertung<\/strong><\/td><td>Nur f\u00fcr Verbindungen mit geringer Permeabilit\u00e4t<\/td><td>Standardvorgehensweise<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Zubereitungszeit<\/strong><\/td><td>Testbereit<\/td><td>Kultivierungstage bis zur Bildung einer qualifizierten Monoschicht<\/td><\/tr>\n        <tr><td><strong>Durchsatz<\/strong><\/td><td>H\u00f6her<\/td><td>Nach unten<\/td><\/tr>\n      <\/tbody>\n    <\/table>\n  <\/div>\n\n  <h2>Der entscheidende Faktor: passive Durchl\u00e4ssigkeit<\/h2>\n\n  <p class=\"lede\">Diese eine Eigenschaft entscheidet dar\u00fcber, ob das vesikul\u00e4re Modell eine Substratfrage \u00fcberhaupt beantworten kann.<\/p>\n\n  <p>Vesikel sind klein, und ihre Membran besteht aus einer Lipid-Doppelschicht. Eine lipophile, hochpermeable Verbindung, die der Transporter in ein Vesikel pumpt, diffundiert sofort wieder heraus, bevor man sie einfangen und messen kann. Die Verbindung ist ein echtes Substrat; der Assay liefert kein Ergebnis.<\/p>\n\n  <p>Bei einer Zellmonoschicht tritt dieses Problem nicht auf, da es sich bei der Messung um ein Verh\u00e4ltnis handelt. Die passive Permeabilit\u00e4t wirkt in beide Richtungen und hebt sich weitgehend gegenseitig auf \u2013 sichtbar bleibt somit die richtungsabh\u00e4ngige Komponente, die durch den aktiven Efflux verursacht wird.<\/p>\n\n  <div class=\"note\">\n    <strong>Faustregel:<\/strong> Zur Substratbewertung k\u00f6nnen Verbindungen mit geringer bis m\u00e4\u00dfiger Permeabilit\u00e4t in Vesikeln verarbeitet werden. Hochpermeable Verbindungen erfordern eine Zellmonoschicht. F\u00fcr <em>Hemmung<\/em> In Studien verschwindet diese Einschr\u00e4nkung gr\u00f6\u00dftenteils, da dort das Sonden-Substrat aufgrund seiner geeigneten Permeabilit\u00e4t ausgew\u00e4hlt wird und Ihre Testverbindung lediglich die Bindungsstelle erreichen muss.\n  <\/div>\n\n  <h2>Was Sie das zellbasierte Format kostet<\/h2>\n\n  <p class=\"lede\">Physiologische Relevanz geht mit Interpretierbarkeit einher.<\/p>\n\n  <ul>\n    <li><strong>Es sind noch weitere Transporter vorhanden.<\/strong> Caco-2-Zellen exprimieren eine Reihe endogener Transporter. Ein Efflux-Verh\u00e4ltnis gibt Aufschluss dar\u00fcber, dass eine Substanz aus der Zelle transportiert wird \u2013 nicht jedoch zwangsl\u00e4ufig dar\u00fcber, welches Protein daf\u00fcr verantwortlich ist.<\/li>\n    <li><strong>Der Stoffwechsel l\u00e4uft einfach.<\/strong> Lebende Zellen f\u00fchren Stoffwechselprozesse durch. Was im Auffangbeh\u00e4lter landet, entspricht m\u00f6glicherweise nicht dem, was Sie hinzugef\u00fcgt haben.<\/li>\n    <li><strong>Die Integrit\u00e4t der Monoschicht muss nachgewiesen werden.<\/strong> Jede Zellkultur muss auf eine Barrierefunktion \u00fcberpr\u00fcft werden \u2013 entweder anhand des transepithelialen Widerstands oder eines parazellul\u00e4ren Markers \u2013, sonst sind die Werte bedeutungslos.<\/li>\n    <li><strong>Zeit.<\/strong> Caco-2-Monolayer m\u00fcssen erst \u00fcber einen l\u00e4ngeren Zeitraum kultiviert werden, bevor sie verwendet werden k\u00f6nnen. Die Vesikel sind sofort einsatzbereit, sobald man sie aus dem Gefrierschrank nimmt.<\/li>\n    <li><strong>Unspezifische Bindung.<\/strong> Lipophile Verbindungen lagern sich an dem Kunststoff und an der Einlegemembran an, was sich als scheinbarer Verlust bemerkbar macht.<\/li>\n  <\/ul>\n\n  <h2>Was Sie das vesikul\u00e4re Format kostet<\/h2>\n\n  <ul>\n    <li><strong>Kein physiologischer Kontext.<\/strong> Ein isolierter Transporter in einem \u201eInside-Out\u201c-Membranfragment ist keine Zelle. Die Zahl ist eindeutig, aber es handelt sich um eine rein mechanistische Zahl.<\/li>\n    <li><strong>Keine Polarit\u00e4t.<\/strong> Es l\u00e4sst sich keinerlei Unterschied zwischen dem apikalen und dem basolateralen Verhalten feststellen.<\/li>\n    <li><strong>Die Substratbewertung ist eingeschr\u00e4nkt<\/strong> zu den Verbindungen, die die Vesikel binden k\u00f6nnen.<\/li>\n    <li><strong>Aufnahmetransporter fallen nicht in den Geltungsbereich.<\/strong> OATP, OAT und OCT transportieren Substrate entlang von Gradienten durch eine intakte Membran \u2013 daf\u00fcr sind Zellen erforderlich. Siehe unsere Seite zu <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dienstleistung-zur-untersuchung-von-wirkstofftransportern-ciptec\/\">ciPTEC f\u00fcr renale Aufnahmetransporter<\/a>.<\/li>\n  <\/ul>\n\n  <h2>Wie man sie kombiniert<\/h2>\n\n  <p class=\"lede\">Bei den meisten gut konzipierten Kaskaden geht es nicht darum, welche man w\u00e4hlt, sondern in welcher Reihenfolge.<\/p>\n\n  <div class=\"tw\">\n    <table>\n      <thead><tr><th>Frage<\/th><th>Format<\/th><\/tr><\/thead>\n      <tbody>\n        <tr><td>Hemmt meine Verbindung P-gp oder BCRP, und wie stark?<\/td><td>Vesikel<\/td><\/tr>\n        <tr><td>IC<sub>50<\/sub> f\u00fcr eine DDI-Einreichung<\/td><td>Vesikel<\/td><\/tr>\n        <tr><td>Ist meine Verbindung ein P-gp-Substrat?<\/td><td>Zellmonoschicht<\/td><\/tr>\n        <tr><td>Substratzustand, Verbindung mit geringer Permeabilit\u00e4t<\/td><td>Die Vesikel sind lebensf\u00e4hig<\/td><\/tr>\n        <tr><td>BSEP und Hepatotoxizit\u00e4tsrisiko<\/td><td>Vesikel \u2013 siehe <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/bsep-inhibition-drug-induced-liver-injury-dili\/\">BSEP und DILI<\/a><\/td><\/tr>\n        <tr><td>Modellierung der Darmresorption<\/td><td>Caco-2<\/td><\/tr>\n        <tr><td>Durchdringung der Blut-Hirn-Schranke<\/td><td>MDCK-MDR1<\/td><\/tr>\n        <tr><td>Transporter f\u00fcr die renale Aufnahme<\/td><td>Zellbasiert \u2014 <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dienstleistung-zur-untersuchung-von-wirkstofftransportern-ciptec\/\">ciPTEC<\/a><\/td><\/tr>\n        <tr><td>Welcher Transporter ist f\u00fcr einen beobachteten Effekt verantwortlich?<\/td><td>Vesikel \u2013 jeweils ein Transporter nach dem anderen<\/td><\/tr>\n      <\/tbody>\n    <\/table>\n  <\/div>\n\n  <p>Ein g\u00e4ngiges und vertretbares Vorgehen: Hemmung in Vesikeln untersuchen, den Substratstatus in einer Monoschicht ermitteln und anschlie\u00dfend wieder zu den Vesikeln zur\u00fcckkehren, um ein etwaiges Signal einem bestimmten Transporter zuzuordnen.<\/p>\n\n  <h2>Was die Aufsichtsbeh\u00f6rden akzeptieren<\/h2>\n\n  <p>ICH M12 (2023) harmonisiert die Anforderungen der FDA und der EMA hinsichtlich transportermittelter Arzneimittelwechselwirkungen und sieht f\u00fcr neue Wirkstoffe eine Bewertung von P-gp und BCRP vor. Ein bestimmtes Format wird dabei nicht vorgeschrieben.<\/p>\n\n  <p>In der Praxis werden eingereichte IC<sub>50<\/sub> Die Werte stammen \u00fcberwiegend aus Vesikel-Assays, w\u00e4hrend die Substratbestimmungen auf zellbasierten Systemen beruhen. Diese Aufteilung orientiert sich eher an den jeweiligen St\u00e4rken der einzelnen Verfahren als an einer festen Regel \u2013 und ein Paket, das beides enth\u00e4lt, wird methodisch selten in Frage gestellt.<\/p>\n\n  <div class=\"faq\">\n    <h2>H\u00e4ufig gestellte Fragen<\/h2>\n\n    <p class=\"fq\">Kann ich den Substratstatus in einem vesikul\u00e4ren Assay bestimmen?<\/p>\n    <p>Nur f\u00fcr Verbindungen mit geringer bis m\u00e4\u00dfiger passiver Permeabilit\u00e4t. Eine hochpermeable Verbindung diffundiert aus der Vesikel zur\u00fcck, bevor sie gemessen werden kann, und der Assay liefert ein falsch-negatives Ergebnis.<\/p>\n\n    <p class=\"fq\">Warum wird das Effluxverh\u00e4ltnis nicht durch die passive Permeabilit\u00e4t beeinflusst?<\/p>\n    <p>Da es sich um ein Verh\u00e4ltnis zweier Richtungen handelt. Die passive Diffusion wirkt sich auf beide aus und gleicht sich weitgehend gegenseitig auf. Was \u00fcbrig bleibt, ist die Richtungskomponente des aktiven Effluxes.<\/p>\n\n    <p class=\"fq\">Welche Zelllinie f\u00fcr welche Barriere?<\/p>\n    <p>Caco-2 f\u00fcr die intestinale Resorption, MDCK-MDR1 f\u00fcr Fragen zur Blut-Hirn-Schranke und zur eindeutigeren Zuordnung zu P-gp. Caco-2 ist physiologischer; MDCK-MDR1 l\u00e4sst sich leichter interpretieren, da der transfizierte Transporter dominiert.<\/p>\n\n    <p class=\"fq\">Kann ich aus einem zellbasierten Assay einen IC50-Wert ermitteln?<\/p>\n    <p>Ja, aber die Zuordnung ist schwieriger, da m\u00f6glicherweise mehrere Transporter daran beteiligt sind. F\u00fcr eine stichhaltige IC-Theorie mit einem einzigen Transporter<sub>50<\/sub>, Vesikel sind der sauberere Weg.<\/p>\n\n    <p class=\"fq\">Warum lassen sich Aufnahmetransporter nicht in Vesikeln untersuchen?<\/p>\n    <p>OATP, OAT und OCT transportieren Substrate durch eine intakte Membran, angetrieben durch elektrochemische Gradienten und nicht durch direkte ATP-Hydrolyse. F\u00fcr ATP-abh\u00e4ngige Efflux-Transporter werden invertierte Vesikel gebildet. F\u00fcr den Aufnahmetransport werden Zellen ben\u00f6tigt.<\/p>\n\n    <p class=\"fq\">Liefern die beiden Formate vergleichbare Zahlen?<\/p>\n    <p>Nicht direkt. Sie messen unterschiedliche Gr\u00f6\u00dfen \u2013 Akkumulation gegen\u00fcber Richtungsfluss \u2013 unter unterschiedlichen Bedingungen. Man sollte Vergleiche innerhalb eines Formats anstellen, nicht zwischen verschiedenen Formaten.<\/p>\n\n    <p class=\"fq\">Welches Format ist schneller?<\/p>\n    <p>Vesikel, und zwar mit gro\u00dfem Abstand. Sie sind bereits nach dem Auftauen bereit f\u00fcr den Assay, w\u00e4hrend eine qualifizierte Caco-2-Monoschicht erst nach tagelanger Kultivierung getestet werden kann.<\/p>\n  <\/div>\n\n  <div class=\"rel\">\n    <h2>Verwandte Themen<\/h2>\n    <div class=\"rg\">\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dmpk-abc-transporter-assays\/\">DMPK- und ABC-Transporter-Assays \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/vesicle-assay-vs-atpase-assay-abc-transporter\/\">Vesikel-Assay vs. ATPase-Assay \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/radiolabel-vs-lcms-vs-fluorescence-vesicle-assay\/\">Vergleich der Erkennungsmethoden \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/hek293-vs-sf9-abc-transporter-vesikel-assay\/\">HEK293 vs. Sf9-Vesikel \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/bsep-inhibition-drug-induced-liver-injury-dili\/\">BSEP-Hemmung &amp; DILI \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dienstleistung-zur-untersuchung-von-wirkstofftransportern-ciptec\/\">ciPTEC-Nierentransporter \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dmpk-transporter-kits\/\">ABC-Transporter-Vesikel-Kits \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/dienstleistung-zum-dmpk-transporter-assay\/\">DMPK-Assay-Service \u2192<\/a>\n      <a href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/kontakt\/\">Kontakt \u2192<\/a>\n    <\/div>\n  <\/div>\n\n  <div class=\"cta\">\n    <h2>Wir liefern beide Seiten dieses Vergleichs<\/h2>\n    <p>Vesikel-Kits f\u00fcr Efflux-Transporter, ciPTEC f\u00fcr die renale Aufnahme \u2013 wir haben also keinen Grund, Ihnen ein bestimmtes Format aufzudr\u00e4ngen. Beschreiben Sie die Fragestellung, und wir sagen Ihnen, welches Format daf\u00fcr geeignet ist.<\/p>\n    <a class=\"btn\" href=\"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/kontakt\/\">Angebot anfordern<\/a>\n  <\/div>\n\n<\/div>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\n<\/div>\n\t\t<\/div>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Home\/ Resources\/ Vesicle vs. Cell-Based DMPK Science \u00b7 Assay Selection \u00b7 Cell4Pharma Vesicle Assay or Cell-Based Assay? \u2014 Choosing a Format for ABC Transporter Work Both formats give you P-gp [&hellip;]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"parent":0,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"_eb_attr":"","_thinkrank_schema_form_data":"","_thinkrank_selected_schema_type":"","_thinkrank_additional_schemas":"","_thinkrank_canonical_url":"","_thinkrank_og_title":"","_thinkrank_og_description":"","_thinkrank_og_image":"","_thinkrank_twitter_title":"","_thinkrank_twitter_description":"","_thinkrank_twitter_image":"","_thinkrank_imported_from":"","_thinkrank_focus_keywords":[],"_thinkrank_focus_keyword":"","_thinkrank_robots_meta_enabled":0,"_thinkrank_robots_meta":"","_thinkrank_advanced_robots_meta":"","_thinkrank_primary_category":0,"footnotes":""},"class_list":["post-2809","page","type-page","status-publish","hentry"],"yoast_head":"<!-- This site is optimized with the Yoast SEO Premium plugin v28.0 (Yoast SEO v28.1) - https:\/\/yoast.com\/product\/yoast-seo-premium-wordpress\/ -->\n<title>Vesicle Assay vs. Cell-Based Assay for ABC Transporters<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Membrane vesicles or a polarised monolayer? 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