{"id":2861,"date":"2026-08-21T20:16:46","date_gmt":"2026-08-21T19:16:46","guid":{"rendered":"https:\/\/wheat-quail-856400.hostingersite.com\/?p=2861"},"modified":"2026-10-20T12:54:16","modified_gmt":"2026-10-20T11:54:16","slug":"normal-serum-ihc-if-blocking-guide","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/normal-serum-ihc-if-blocking-guide\/","title":{"rendered":"Normalserum zum Blocken in IHC & IF"},"content":{"rendered":"

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August 2026 \u00b7 6 Min. Lesezeit<\/em><\/p>\n

Die Wahl des Blockierserums ist eines dieser Protokolldetails, die ohne viel Nachdenken von Paper zu Paper \u00fcbernommen werden \u2013 bis ein hoher Hintergrund auftritt, den Sie sich nicht erkl\u00e4ren k\u00f6nnen. Die Spezies des Blockierserums z\u00e4hlt. Die Konzentration z\u00e4hlt. Die Hitzeinaktivierung z\u00e4hlt. Hier der vollst\u00e4ndige Leitfaden.<\/p>\n

Warum Blockierserum wirkt \u2013 der Mechanismus<\/h2>\n

Unspezifischer Hintergrund in IHC und Immunfluoreszenz hat vor allem zwei Ursachen:<\/p>\n

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  1. Bindung an Fc-Rezeptoren:<\/strong> Sekund\u00e4rantik\u00f6rper besitzen Fc-Regionen, die an Fc-Rezeptoren auf Makrophagen, dendritischen Zellen und anderen Immunzellen im Gewebeschnitt binden \u2013 das erzeugt ein unspezifisches Signal unabh\u00e4ngig von der Bindung des Prim\u00e4rantik\u00f6rpers.<\/li>\n
  2. Ladungsbedingte unspezifische Bindung:<\/strong> IgG-Molek\u00fcle sind bei physiologischem pH positiv geladen und k\u00f6nnen unspezifisch an negativ geladene Gewebebestandteile (Kollagen, Nukleins\u00e4uren) binden.<\/li>\n<\/ol>\n

    Blockierserum s\u00e4ttigt Fc-Rezeptoren und unspezifische Bindungsstellen, bevor der Prim\u00e4rantik\u00f6rper aufgetragen wird. Das IgG im Blockierserum besetzt diese Stellen \u2013 wenn der Sekund\u00e4rantik\u00f6rper hinzukommt, bleiben ihm nur die spezifischen Bindungsstellen am Prim\u00e4rantik\u00f6rper.<\/p>\n

    Die Spezies-Regel \u2013 die wichtigste Entscheidung<\/h2>\n

    Die Spezies des Blockierserums muss der Spezies entsprechen, in der Ihr Sekund\u00e4rantik\u00f6rper hergestellt wurde \u2013 nicht der Spezies des Prim\u00e4rantik\u00f6rpers.<\/p>\n

    Beispiel:<\/strong> Prim\u00e4rantik\u00f6rper = Kaninchen-Anti-Human-CD3 (im Kaninchen hergestellt). Sekund\u00e4rantik\u00f6rper = Esel-Anti-Kaninchen-IgG-AF488 (im Esel hergestellt). Blockierserum = normales Eselserum<\/strong>.<\/p>\n

    Die Logik: Ihr Sekund\u00e4rantik\u00f6rper wurde im Esel hergestellt und kreuzreagiert daher mit Esel-IgG. Blocken Sie mit Eselserum, besetzt das IgG im Blockierserum die unspezifischen Stellen. Kommt der Esel-Sekund\u00e4rantik\u00f6rper hinzu, kann er dort nicht binden, weil die Stellen bereits durch passendes Esel-IgG belegt sind.<\/p>\n

    Verwenden Sie zum Blocken die falsche Spezies (z. B. Ziegenserum bei einem Esel-Anti-Kaninchen-Sekund\u00e4rantik\u00f6rper), konkurriert das IgG im Blockierserum nicht mit dem Sekund\u00e4rantik\u00f6rper um die unspezifischen Bindungsstellen \u2013 der Hintergrund bleibt hoch.<\/p>\n

    Speziesauswahl \u2013 welches Serum f\u00fcr welchen Sekund\u00e4rantik\u00f6rper<\/h2>\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n
    Sekund\u00e4rantik\u00f6rper hergestellt in<\/th>\nRichtiges Blockierserum<\/th>\nSeamlessBio-Produkt<\/th>\n<\/tr>\n
    Esel<\/td>\nNormales Eselserum (NDS)<\/td>\nEsel-Serum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n
    Ziege<\/td>\nNormales Ziegenserum (NGS)<\/td>\nZiegenserum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n
    Kaninchen<\/td>\nNormales Kaninchenserum (NRS)<\/td>\nKaninchenserum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n
    Pferd<\/td>\nNormales Pferdeserum (NHS)<\/td>\nPferdeserum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n
    Schaf<\/td>\nNormales Schafserum (NSS)<\/td>\nSchafserum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n
    Huhn<\/td>\nNormales H\u00fchnerserum<\/td>\nH\u00fchnerserum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n
    Meerschweinchen<\/td>\nNormales Meerschweinchenserum (NGPS)<\/td>\nMeerschweinchen-Serum<\/a><\/td>\n<\/tr>\n<\/table>\n

    Warum Eselserum immer h\u00e4ufiger der Standard ist<\/h2>\n

    Mehrfachmarkierungen in der Immunfluoreszenz \u2013 drei oder vier Antigene gleichzeitig mit spektral unterschiedlichen Fluorophoren \u2013 erfordern Sekund\u00e4rantik\u00f6rper aus verschiedenen Spezies, um Kreuzreaktivit\u00e4t zu vermeiden. Stammen alle Sekund\u00e4rantik\u00f6rper aus dem Esel (Esel-Anti-Kaninchen, Esel-Anti-Maus, Esel-Anti-Ziege), gen\u00fcgt ein einziger Blockierschritt mit normalem Eselserum. Das vereinfacht das Protokoll und vermeidet die bei Mehrfachf\u00e4rbungen h\u00e4ufigen Fehler durch Spezieswechsel.<\/p>\n

    Da gro\u00dfe Anbieter f\u00fcr spezies\u00fcbergreifend kreuzadsorbierte Panels \u00fcberwiegend im Esel hergestellte Sekund\u00e4rantik\u00f6rper anbieten, ist normales Eselserum das am h\u00e4ufigsten verwendete Blockierreagenz bei Mehrfachf\u00e4rbungen in IHC und IF.<\/p>\n

    Standard-Blockierprotokoll<\/h2>\n
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    1. Nach Antigendemaskierung und Permeabilisierung (falls erforderlich) \u00fcbersch\u00fcssigen Puffer abtropfen lassen \u2013 nicht abwaschen<\/li>\n
    2. Blockierl\u00f6sung auftragen: 5\u201310 % Normalserum<\/strong> in PBS (bzw. PBST f\u00fcr permeabilisierte Zellen) \u2013 200\u2013300 \u00b5l pro Schnitt oder Well<\/li>\n
    3. Inkubieren 30\u201360 Minuten<\/strong> bei Raumtemperatur in einer feuchten Kammer<\/li>\n
    4. Nicht waschen<\/strong> \u2013 \u00fcbersch\u00fcssige Blockierl\u00f6sung durch Kippen des Objekttr\u00e4gers abtropfen lassen; das verbleibende Blockierserum h\u00e4lt die unspezifischen Stellen w\u00e4hrend der Inkubation mit dem Prim\u00e4rantik\u00f6rper ges\u00e4ttigt<\/li>\n
    5. Prim\u00e4rantik\u00f6rper auftragen, verd\u00fcnnt im selben Blockierpuffer<\/strong> (1\u20135 % Normalserum in PBS) \u2013 so bleiben die Blockierbedingungen w\u00e4hrend der gesamten Prim\u00e4rantik\u00f6rper-Inkubation erhalten<\/li>\n<\/ol>\n

      Hitzeinaktivierung \u2013 n\u00f6tig oder nicht?<\/h2>\n

      Die Hitzeinaktivierung (56 \u00b0C, 30 min) zerst\u00f6rt die Komplementaktivit\u00e4t. F\u00fcr das Blocken in IHC und IF wird sie empfohlen, wenn:<\/p>\n