{"id":9539,"date":"2026-10-20T15:11:13","date_gmt":"2026-10-20T14:11:13","guid":{"rendered":"https:\/\/wheat-quail-856400.hostingersite.com\/fbs-dialysis-protocol\/"},"modified":"2026-10-20T15:17:49","modified_gmt":"2026-10-20T14:17:49","slug":"fks-dialyse-protokoll","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/seamlessbio.de\/de\/fbs-dialysis-protocol\/","title":{"rendered":"FKS-Dialyse-Protokoll: So stellen Sie dialysiertes fetales K\u00e4lberserum her"},"content":{"rendered":"<p>Standard-FKS enth\u00e4lt Glukose, Aminos\u00e4uren, Nukleotide, Vitamine und andere kleine Molek\u00fcle. Bei SILAC-Proteomik, \u00b9\u00b3C-Stoffflussanalyse, Metabolomik und Selektionssystemen auf Basis des Nukleotidstoffwechsels st\u00f6ren diese Molek\u00fcle: Sie verd\u00fcnnen Isotopenmarkierungen oder \u00fcberdecken den Metaboliten, den Sie messen wollen. <strong>Dialysiertes FKS<\/strong> ist von diesen kleinen Molek\u00fclen befreit, w\u00e4hrend Albumin, Wachstumsfaktoren und andere Proteine erhalten bleiben.<\/p>\n<p>Dieses Protokoll beschreibt die Dialyse von FKS im Labor. F\u00fcr gr\u00f6\u00dfere Volumina und dokumentierte Chargen bietet SeamlessBio au\u00dferdem <a href=\"\/de\/serumaufbereitung\/\">die Dialyse als Serumaufbereitungs-Dienstleistung<\/a>. Hintergrund zu den Anwendungen: <a href=\"\/de\/what-is-dialyzed-fbs\/\">Was ist dialysiertes FKS?<\/a><\/p>\n<h2>So funktioniert die Serumdialyse<\/h2>\n<p>Das Serum wird in eine semipermeable Membran (Dialyseschlauch oder -kassette) gef\u00fcllt und in ein gro\u00dfes Puffervolumen getaucht.<\/p>\n<ul>\n<li>Molek\u00fcle, <strong>die kleiner sind als die Ausschlussgrenze der Membran (MWCO),<\/strong> diffundieren in den Puffer, bis sich die Konzentrationen angleichen.<\/li>\n<li><strong>Gr\u00f6\u00dfere Molek\u00fcle<\/strong> bleiben im Inneren: Albumin (ca. 66 kDa), Transferrin (ca. 80 kDa), IgG (ca. 150 kDa) und die meisten Wachstumsfaktoren.<\/li>\n<\/ul>\n<p>Mehrmaliger Pufferwechsel senkt die kleinen Molek\u00fcle auf sehr niedrige Restgehalte.<\/p>\n<p><strong>Wahl der Ausschlussgrenze:<\/strong><br \/>\n&#8211; <strong>10 kDa<\/strong> ist die h\u00e4ufigste Wahl f\u00fcr dialysiertes FKS. Damit werden Aminos\u00e4uren, Glukose und Nukleotide zuverl\u00e4ssig entfernt.<br \/>\n&#8211; <strong>3,5 kDa<\/strong> h\u00e4lt kleinere Peptide und kleine Proteine zur\u00fcck, dauert aber l\u00e4nger.<\/p>\n<h2>Material<\/h2>\n<ul>\n<li>FKS, z. B. <a href=\"\/de\/fks-standard\/\">FBS Standard<\/a> oder <a href=\"\/de\/fks-premium\/\">FBS Premium<\/a>, bei 2\u20138 \u00b0C aufgetaut<\/li>\n<li>Dialyseschl\u00e4uche oder -kassetten, MWCO 10 kDa (alternativ 3,5 kDa)<\/li>\n<li>Dialysepuffer: sterile 0,9-%-NaCl-L\u00f6sung (0,15 M) oder PBS ohne Ca\u00b2\u207a\/Mg\u00b2\u207a, auf 2\u20138 \u00b0C vorgek\u00fchlt<\/li>\n<li>Klemmen f\u00fcr Dialyseschl\u00e4uche, gro\u00dfes Becherglas oder Gef\u00e4\u00df, Magnetr\u00fchrer<\/li>\n<li>K\u00fchlraum oder K\u00fchlschrank (2\u20138 \u00b0C)<\/li>\n<li>Filter: 0,45-\u00b5m-Vorfilter und 0,2-\u00b5m-Sterilfilter, geringe Proteinbindung (PES)<\/li>\n<\/ul>\n<h2>Schritt-f\u00fcr-Schritt-Anleitung<\/h2>\n<h3>1. Membran vorbereiten<\/h3>\n<ol>\n<li>Den Dialyseschlauch auf L\u00e4nge schneiden. Platz f\u00fcr Klemmen und f\u00fcr eine Volumenzunahme von etwa 10\u201320 % lassen.<\/li>\n<li>Die Membran nach Herstellerangaben vorbereiten. Viele Membranen m\u00fcssen in Wasser oder Puffer gesp\u00fclt oder eingeweicht werden, um Glycerin oder Konservierungsmittel zu entfernen.<\/li>\n<\/ol>\n<h3>2. Bef\u00fcllen<\/h3>\n<ol start=\"3\">\n<li>Ein Ende des Schlauchs mit einer Klemme verschlie\u00dfen und mit dem aufgetauten Serum f\u00fcllen.<\/li>\n<li>Die meiste Luft entfernen, aber etwas Kopfraum lassen: Wegen der hohen Proteinkonzentration im Serum str\u00f6mt w\u00e4hrend der Dialyse Wasser in den Schlauch.<\/li>\n<li>Das zweite Ende verschlie\u00dfen.<\/li>\n<\/ol>\n<h3>3. Dialysieren<\/h3>\n<ol start=\"6\">\n<li>Den gef\u00fcllten Schlauch in mindestens das <strong>50-fache seines Volumens<\/strong> an kaltem Puffer legen (z. B. 100 ml Serum in mindestens 5 l Puffer).<\/li>\n<li>Langsam r\u00fchren bei <strong>2\u20138 \u00b0C<\/strong>. Der Schlauch sollte frei schwimmen und darf nicht vom R\u00fchrfisch erfasst werden.<\/li>\n<li>Puffer wechseln: <strong>3\u20134-mal \u00fcber 24\u201348 Stunden<\/strong>. Ein g\u00e4ngiger Plan ist nach 4 h, nach 8\u201312 h (\u00fcber Nacht) und nach weiteren 12\u201324 h.<\/li>\n<\/ol>\n<h3>4. Ernten<\/h3>\n<ol start=\"9\">\n<li>Den Schlauch herausnehmen, au\u00dfen kurz mit Puffer absp\u00fclen und ein Ende \u00f6ffnen.<\/li>\n<li>Das Serum in ein steriles Gef\u00e4\u00df \u00fcberf\u00fchren und das Endvolumen notieren. Durch den Wassereinstrom ist das Serum nun etwas verd\u00fcnnt.<\/li>\n<\/ol>\n<h3>5. Sterilfiltrieren<\/h3>\n<ol start=\"11\">\n<li>\u00dcber 0,45 \u00b5m vorfiltrieren, dann \u00fcber 0,2 \u00b5m sterilfiltrieren. Die Dialyse ist kein steriler Schritt \u2013 diese Filtration ist vor der Zellkultur zwingend.<\/li>\n<\/ol>\n<h3>6. Aliquotieren und lagern<\/h3>\n<ol start=\"12\">\n<li>Aliquotieren und bei \u221220 \u00b0C lagern. Als \u201edialysiertes FKS\u201c mit MWCO, Datum und Charge beschriften.<\/li>\n<\/ol>\n<h3>7. Qualit\u00e4tskontrolle<\/h3>\n<ol start=\"13\">\n<li>Glukose und bei SILAC die relevanten Aminos\u00e4uren (z. B. Arginin, Lysin) im dialysierten Serum messen. Sie sollten an oder nahe der Nachweisgrenze liegen.<\/li>\n<li>Osmolalit\u00e4t und Gesamtprotein pr\u00fcfen. Sie zeigen, ob eine Verd\u00fcnnung oder ein Salzungleichgewicht korrigiert werden muss.<\/li>\n<li>Das Wachstum Ihrer Zelllinie im fertigen Medium testen, bevor das Experiment beginnt.<\/li>\n<\/ol>\n<h2>Praktische Tipps<\/h2>\n<ul>\n<li><strong>Der Puffer bestimmt die Salzzusammensetzung.<\/strong> Die Dialyse gegen Ca\u00b2\u207a\/Mg\u00b2\u207a-freies PBS entfernt auch freies Calcium und Magnesium aus dem Serum. Meist liefert das Kulturmedium diese Ionen.<\/li>\n<li><strong>Medium erg\u00e4nzen.<\/strong> Dialysiertem FKS fehlen Aminos\u00e4uren, Glukose und Nukleoside. Ihr Medium muss sie liefern \u2013 definiert oder f\u00fcr SILAC markiert.<\/li>\n<li><strong>Mit langsamerem Wachstum rechnen.<\/strong> Manche Zelllinien wachsen in dialysiertem FKS langsamer. Eine leicht h\u00f6here Serumkonzentration oder eine schrittweise Adaption der Zellen kann helfen.<\/li>\n<li><strong>Kalt arbeiten.<\/strong> Die Dialyse bei 2\u20138 \u00b0C verringert Proteinabbau und mikrobielles Wachstum w\u00e4hrend der langen Inkubation.<\/li>\n<\/ul>\n<h2>Anwendungen<\/h2>\n<ul>\n<li><strong>SILAC-Proteomik:<\/strong> entfernt unmarkiertes Arginin und Lysin, sodass die Zellen die schweren Isotope effizient einbauen.<\/li>\n<li><strong>\u00b9\u00b3C-Stoffflussanalyse und Metabolomik:<\/strong> entfernt Hintergrund an Glukose, Glutamin und anderen Metaboliten.<\/li>\n<li><strong>Selektionssysteme:<\/strong> zum Beispiel HAT und andere Selektionen auf Basis des Nukleotidstoffwechsels, bei denen Serumnukleoside st\u00f6ren.<\/li>\n<li><strong>Studien zur Aufnahme von N\u00e4hrstoffen und Arzneistoffen:<\/strong> definierte Konzentrationen kleiner Molek\u00fcle im Medium.<\/li>\n<\/ul>\n<h2>H\u00e4ufig gestellte Fragen<\/h2>\n<p><strong>Was ist dialysiertes FKS?<\/strong><br \/>\nFKS, aus dem kleine Molek\u00fcle (Aminos\u00e4uren, Glukose, Nukleotide, Vitamine) per Dialyse entfernt wurden, w\u00e4hrend Proteine wie Albumin und Wachstumsfaktoren erhalten bleiben. Siehe <a href=\"\/de\/what-is-dialyzed-fbs\/\">Was ist dialysiertes FKS?<\/a><\/p>\n<p><strong>Welche Ausschlussgrenze sollte ich f\u00fcr die FKS-Dialyse verwenden?<\/strong><br \/>\n10 kDa ist die h\u00e4ufigste Wahl. Eine 3,5-kDa-Membran h\u00e4lt mehr kleine Proteine und Peptide zur\u00fcck, dauert aber l\u00e4nger.<\/p>\n<p><strong>Wie lange dauert die FKS-Dialyse?<\/strong><br \/>\nTypischerweise 24\u201348 Stunden bei 2\u20138 \u00b0C mit 3\u20134 Pufferwechseln.<\/p>\n<p><strong>Entfernt die Dialyse Hormone aus dem Serum?<\/strong><br \/>\nTeilweise. Freie kleine Hormone k\u00f6nnen die Membran passieren, viele Steroid- und Schilddr\u00fcsenhormone sind aber an Proteine wie Albumin gebunden und bleiben im Serum. Um gezielt Hormone zu entfernen, verwenden Sie die <a href=\"\/de\/fks-aktivkohle-behandlung-protokoll\/\">Aktivkohlebehandlung<\/a>.<\/p>\n<p><strong>Ist dialysiertes FKS steril?<\/strong><br \/>\nNur wenn es nach der Dialyse sterilfiltriert wird. Die Dialyse selbst ist kein steriler Prozess.<\/p>\n<p><strong>Kann ich dialysiertes FKS kaufen, statt es selbst herzustellen?<\/strong><br \/>\nJa. SeamlessBio dialysiert FKS und andere Seren auf Anfrage im Rahmen unserer <a href=\"\/de\/serumaufbereitung\/\">Serumaufbereitung als Dienstleistung<\/a>, ab 100 ml. Preise und Lieferzeiten auf Anfrage \u2013 <a href=\"\/de\/request-quote\/\">Angebot anfordern<\/a>.<\/p>\n<p><strong>Verwandte Themen:<\/strong> <a href=\"\/de\/what-is-dialyzed-fbs\/\">Was ist dialysiertes FBS?<\/a> \u00b7 <a href=\"\/de\/serumaufbereitung\/\">Dienstleistungen zur Serumaufbereitung<\/a> \u00b7 <a href=\"\/de\/fks-aktivkohle-behandlung-protokoll\/\">Protokoll zur Aktivkohlebehandlung von FKS<\/a> \u00b7 <a href=\"\/de\/fetales-kaelberserum\/\">F\u00f6tales K\u00e4lberserum (FKS)<\/a> \u00b7 <a href=\"\/de\/serumfreie-zellkulturmedien\/\">Serumfreie Systeme<\/a><\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Schritt-f\u00fcr-Schritt-Protokoll zur Dialyse von fetalem K\u00e4lberserum: Ausschlussgrenze der Membran, Puffervolumen und -wechsel, Sterilfiltration und QC f\u00fcr SILAC und Metabolomik.<\/p>","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_templately_pack_id":"","_templately_imported_at":"","_templately_source":"","_templately_import_session_id":"","footnotes":""},"categories":[258],"tags":[],"class_list":["post-9539","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-protocols"],"yoast_head":"<!-- This site is optimized with the Yoast SEO plugin v28.7 - 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