Eine neue FKS-Charge validieren: Schritt-für-Schritt-Protokoll für Zellkulturlabore

Testvolumen anfordern und Analysenzertifikat prüfen

Prüfen Sie vor jedem zellbasierten Assay das CoA Ihres Lieferanten. Wichtige Parameter: Gesamtprotein (typischerweise 35–45 mg/ml bei Standard-FKS), Hämoglobin (<25 mg/dl bei hämoglobinarmer Qualität), Endotoxin (<10 EU/ml Standard; <5 EU/ml Low Endotoxin; <1 EU/ml Ultra Low), pH (6,8–7,6), Osmolalität (260–340 mOsm/kg), mykoplasmenfrei, Sterilität bestanden.

Fordern Sie ein Testvolumen von 100–500 ml an – genug für mindestens 3 unabhängige Validierungsexperimente parallel zu Ihrer aktuellen Referenzcharge.

Beide Chargen identisch für den Test vorbereiten

Tauen Sie die Testcharge und Ihre aktuelle Referenzcharge unter identischen Bedingungen auf (37-°C-Wasserbad, <30 min). Inaktivieren Sie beide durch Hitze, falls Ihr Protokoll das vorsieht (56 °C, 30 min). Aliquotieren und lagern Sie identisch. Führen Sie zwischen den Chargen keine andere Variable ein als die Charge selbst.

Proliferations- / Wachstumsassay mit Ihrer empfindlichsten Zelllinie durchführen

Säen Sie Ihre serumempfindlichste Zelllinie in definierter Dichte in Dreifachansätzen aus – mit Referenz- und Testcharge in Ihrer üblichen Arbeitskonzentration (typischerweise 5–10 %). Zählen Sie die Zellen (oder messen Sie die Absorption per MTT/MTS) nach 48 h und 96 h. Berechnen Sie Wachstumsrate und Verdopplungszeit. Akzeptanzkriterium: Wachstumsrate der Testcharge innerhalb von ±15–20 % der Referenzcharge oder gemäß Ihrer internen Spezifikation.

Anwendungsspezifischen Funktionsassay durchführen

Wachstumsunterstützung allein reicht nicht – validieren Sie die Charge im Assay-Kontext, in dem sie tatsächlich eingesetzt wird. Für mAb-Hersteller: Antikörpertiter oder Klonierungseffizienz messen. In der Diagnostikentwicklung: Ziel-Immunoassay durchführen und das Signal-Rausch-Verhältnis beider Chargen vergleichen. Bei viralen Vektoren: Transduktionseffizienz oder Titrationsergebnisse vergleichen. Das ist der wichtigste Schritt – und der, den die meisten Labore unter Zeitdruck auslassen.

Sterilitäts- und Mykoplasmenprüfung am Testvolumen durchführen

Auch wenn das CoA des Lieferanten Mykoplasmenfreiheit bestätigt, gibt ein schneller PCR-basierter Mykoplasmentest am erhaltenen Material zusätzliche Sicherheit und schafft einen dokumentierten internen Nachweis. In regulierten Herstellungsumgebungen ist das eine GMP-Anforderung. In Forschungslaboren ist es gute Praxis, die seltene Kontaminationen bei Versand oder Handhabung aufdeckt.

Dokumentieren und über die Chargenfreigabe entscheiden

Halten Sie alle Ergebnisse in einem Chargenvalidierungsbericht fest: Chargennummer, Herkunft, Lieferant, Eingangsdatum, Testvolumen, verwendete Zelllinie, Assaymethoden, Ergebnisse im Vergleich zu den Akzeptanzkriterien und endgültige Entscheidung (Annahme/Ablehnung). Archivieren Sie CoA, CoO und alle vom Lieferanten bereitgestellten TSE/BSE- oder Virussicherheitsunterlagen zusammen mit dem Bericht. Dieser Nachweis ist Ihre Referenz, wenn die Charge in einem Audit oder einer Zulassungseinreichung hinterfragt wird.

Bulk-Charge vor der Bestellung reservieren

Sobald das Testvolumen Ihre Akzeptanzkriterien erfüllt, kontaktieren Sie Ihren Lieferanten, um das restliche Chargenvolumen zu reservieren. In einem knappen Markt sind validierte Chargen schnell vergriffen. Die Chargenreservierung sichert Ihre getesteten Spezifikationen – Sie bestellen genau die Charge, die Sie validiert haben, und keinen Ersatz.