SimplaceX – serumfreies Medium für HEK293T
Gebrauchsfertiges serumfreies Medium für die adhärente HEK293T-Kultur – optimiert für AAV-Produktion, lentivirale Vektorherstellung und rekombinante Proteinexpression. Kein tierisches Serum. Keine Chargenschwankungen wie bei FBS.
Was ist SimplaceX?
SimplaceX ist ein serumfreies, proteinsupplementiertes Zellkulturmedium für die adhärente HEK293T-Kultur. Es ersetzt FBS als einziges Supplement – mit den Wachstumsfaktoren, Trägerproteinen und Lipiden, die HEK293T für Proliferation und Transfektionseffizienz braucht, ohne tierisches Serum und ohne die Chargenschwankungen, die FBS in die AAV- und LV-Produktion bringt.
SimplaceX ist als erstes Medium für die serumfreie Adaptation von HEK293T konzipiert: Das Proteinsupplement unterstützt Zelladhäsion und Wachstum beim Übergang von FBS-haltigem Medium und macht die Adaptation deutlich einfacher als mit vollständig chemisch definierten Medien. Sind die Zellen vollständig an SimplaceX adaptiert, ist der Wechsel zu SimplaceCDX (vollständig chemisch definiert) unkompliziert, falls er aus GMP- oder regulatorischen Gründen nötig ist.
Wichtigste Merkmale
Kein FBS – keine Chargenqualifizierung
Keine FBS-Chargentests mehr in Ihrem AAV-Prozess. SimplaceX enthält ein definiertes Proteinsupplement – keine Schwankungen der Wachstumsfaktor-Zusammensetzung zwischen Chargen.
Transfektionskompatibel
Optimiert für die PEI-vermittelte Tripeltransfektion – den Standard der AAV-Produktion in HEK293T. Kompatibel mit linearem PEI 25 kDa, PEI-Max und Calciumphosphat.
Protokoll zur Rettung von Suspensionszellen
HEK293T-Zellen, die sich während der serumfreien Adaptation ablösen, sollten gerettet und nicht verworfen werden. SimplaceX ist gezielt so formuliert, dass es diese Zellen bei der Rückführung in die adhärente Kultur unterstützt.
Produktinformationen
| Parameter | Spezifikation |
|---|---|
| Format | Serumfrei, proteinsupplementiert – gebrauchsfertige Lösung |
| Zelltyp | HEK293T (adhärent) – auch geeignet für HEK293, HEK293FT |
| Hauptanwendung | AAV-Produktion, lentivirale Vektorherstellung, rekombinante Proteinexpression |
| Verfügbare Volumina | 500 ml, 2.000 ml – größere Volumina auf Anfrage |
| Frei von tierischen Bestandteilen | Kein tierisches Serum – Proteinsupplement aus definierten Quellen |
| Transfektionsverträglichkeit | PEI (linear, 25 kDa), PEI-Max, Calciumphosphat, Lipofektionsreagenzien |
| pH | 7.2–7.4 |
| Osmolalität | 290–320 mOsm/kg |
| Sterilität | 0,2 µm sterilfiltriert – Sterilitätsprüfung je Charge |
| Lagerung | 2–8 °C, lichtgeschützt – 12 Monate ab Herstellung stabil |
| Dokumentation | Analysenzertifikat, Datenblatt – vollständige regulatorische Dokumentation auf Anfrage |
| GMP-Signalweg | In Entwicklung – fragen Sie uns nach dem Zeitplan |
SimplaceX vs. FBS-haltiges Medium
| Parameter | SimplaceX | DMEM + 10 % FKS |
|---|---|---|
| Chargen-zu-Chargen-Schwankungen | ✅ Definierte Zusammensetzung – keine Chargenqualifizierung nötig | ⚠️ Abhängig von der FBS-Charge – Qualifizierung je Charge nötig |
| Endotoxin | ✅ <1 EU/ml – kontrolliert | ⚠️ Variabel – bis zu 10 EU/ml in Standard-FBS |
| TSE/BSE-Dokumentation | ✅ Nicht erforderlich | ⚠️ Erforderlich – Herkunftszertifikat je Charge |
| Nachgeschaltete Reinigung | ✅ Keine Rinderserumproteine zu entfernen | ⚠️ Rinderalbumin wird mit AAV mitgereinigt |
| GMP-Signalweg | ✅ Einfacher – tierfreier Rohstoff | ⚠️ Komplex – FBS gehört zur Rohstoffkategorie mit dem höchsten Risiko |
| Adaptation erforderlich | ⚠️ 5–10 Passagen bis zur vollständigen Adaptation | ✅ Keine |
| AAV-Titer (optimiert) | ✅ Nach vollständiger Adaptation gleichwertig zu FBS | ✅ Referenz |
HEK293T-Adaptationsprotokoll – SimplaceX
HEK293T-Zellen adaptieren sich in 5–10 Passagen an SimplaceX, mit schrittweiser FBS-Reduktion. Der wichtigste Grundsatz: Suspensionszellen während der Adaptation nie verwerfen – abzentrifugieren und in die Flasche zurückgeben.
Passagen 1–3 – schrittweise FBS-Reduktion
P1: DMEM + 1 % FKS + 1× SimplaceX | P2–3: DMEM + 0,5 % FKS + 1× SimplaceX
Wenig FBS verlangsamt den Übergang bewusst – stabilere Adaptation, weniger Zellstress.
Passagen 4–6 – vollständig serumfrei mit SimplaceX
DMEM + 1× SimplaceX. Bei jedem Mediumwechsel: Medium sammeln → 300 × g, 5 min zentrifugieren → Pellet in frischem SimplaceX resuspendieren → mit den trypsinierten adhärenten Zellen in die Flasche zurückgeben.
Ablösen – serumfreies Protokoll
Bevorzugt: PBS + 5 mM EDTA – 3–5 min bei 37 °C. Keine Enzyminaktivierung nötig.
Alternative: 0,05 % Trypsin-EDTA – sofort abzentrifugieren, Trypsin vollständig entfernen, in SimplaceX resuspendieren.
Passagen 7–25 – Erholung der Wachstumsrate
Die Verdopplungszeit erholt sich über 5–20 Passagen. In der frühen serumfreien Phase sind 28–42 h zu erwarten, bis Passage 15–25 sinkt sie auf 18–24 h (FBS-Niveau). Das Rettungsprotokoll für Suspensionszellen durchgehend fortführen.
Anwendungen
AAV-Produktion
Transiente Tripeltransfektion in adhärenter HEK293T-Kultur – AAV2, AAV5, AAV8, AAV9 und neue Serotypen. Keine FBS-Chargenqualifizierung, kein BVDV-Testaufwand.
Lentivirale Vektoren
HEK293T-Tripeltransfektion für lentivirale Verpackungssysteme der 3. und 4. Generation – Vektorproduktion für CAR-T, Genkorrektur und Base Editing.
Rekombinantes Protein
Transiente oder stabile rekombinante Proteinexpression in HEK293T – vereinfachte Aufreinigung ohne Rinderserumproteine.
Häufig gestellte Fragen
Wie viele Passagen dauert die Adaptation von HEK293T an SimplaceX?
Die vollständige Adaptation dauert typischerweise 5–10 Passagen. Die Wachstumsrate (Verdopplungszeit) erreicht danach über weitere 5–20 Passagen wieder FBS-Niveau. Das Rettungsprotokoll für Suspensionszellen bei jeder Passage ist der wichtigste Faktor für eine kürzere Adaptationszeit.
Welcher AAV-Titer ist in SimplaceX im Vergleich zu FBS zu erwarten?
Nach vollständiger Adaptation liegen die AAV-Titer in SimplaceX in den meisten HEK293T-Systemen innerhalb des 1,5-Fachen von optimiertem FBS (Low Endotoxin). Führen Sie vor der serumfreien Produktion im vollen Maßstab einen kleinen Produktionstest durch (eine 15-cm-Schale).
Kann ich SimplaceX direkt ohne FBS-Reduktionsschritte einsetzen?
Nicht empfohlen. Eine schrittweise FBS-Reduktion (1 % → 0,5 % → 0 %) über 3 Passagen vor dem vollständigen Wechsel auf SimplaceX führt zu deutlich besseren Adaptationsergebnissen als ein direkter Wechsel. Die Zellen adaptieren stabiler und erholen ihre Wachstumsrate schneller.
Was ist der Unterschied zwischen SimplaceX und SimplaceCDX?
SimplaceX enthält ein definiertes Proteinsupplement – es ist serumfrei, aber nicht vollständig chemisch definiert. SimplaceCDX ist vollständig chemisch definiert, ohne tierische oder rekombinante Proteinbestandteile – nötig für Prozesse, in denen eine CDM-Dokumentation für GMP oder Zulassungsunterlagen gefordert ist. Erst an SimplaceX adaptieren, dann bei Bedarf auf SimplaceCDX wechseln.
Gibt es zu SimplaceX ein Datenblatt?
Ja – ein vollständiges technisches Datenblatt liegt jeder Bestellung bei und ist auf Anfrage auch vor dem Kauf erhältlich.
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SimplaceX anfragen – Muster oder Angebot
In 500 ml und 2.000 ml erhältlich. Vollständiges Datenblatt inklusive. Kostenloses Testmuster für die Adaptationsprüfung auf Anfrage.
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