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SeamlessBio – Lösungen nach Anwendungsbereich

Zelltherapie und ATMP-Herstellung – Leitfaden zur Beschaffung von FBS, Humanserum und hPL

Arzneimittel für neuartige Therapien – CAR-T-Zellen, aus iPS-Zellen gewonnene Therapien, genmodifizierte Zellprodukte – stellen außergewöhnlich hohe Anforderungen an biologische Rohstoffe. Serumchargen müssen Monate im Voraus vorab geprüft und reserviert werden, der Endotoxingehalt muss minimal sein, und für induzierbare Expressionssysteme sind tetracyclinfreie Qualitäten zwingend erforderlich. SeamlessBio liefert Spezialprodukte wie FBS, Humanserum, hPL und Bioprozessbeutel für die ATMP-Herstellung mit EU-Lieferkette, Chargenreservierung und vollständiger EMA-Dokumentation.

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⚠ EMA/410/01 – Die regulatorischen Rahmenbedingungen für Serum bei der Herstellung von ATMP: Die EMA-Leitlinie EMA/410/01 rät ausdrücklich von der Verwendung von FBS bei der Herstellung von ATMP-Zellprodukten, einschließlich CAR-T-Zellprodukten, ab. Menschliches Serum ist das bevorzugte Hilfsmaterial. Für alle aus menschlichen Quellen stammenden Hilfsstoffe in der Herstellung gemäß GMP ist eine Dokumentation gemäß Ph. Eur. 5.2.12 erforderlich. SeamlessBio stellt auf Anfrage eine vollständige Dokumentation gemäß Ph. Eur. 5.2.12 und Eudralex Band 4, Teil IV zur Verfügung. Sofern FBS weiterhin verwendet wird (Forschungsphase, nichtklinische Studien), FBS Tet-frei, Extrem niedriger IgG-Spiegel und Geringer Endotoxingehalt Noten sind obligatorisch – nicht nach dem Standard FBS.

Humanes Serum AB OTC, männlich

GMP – Goldstandard für die Ex-vivo-T-Zell-Expansion. Blutgruppe AB – keine Anti-A/B-Agglutination. Männliche Spender – keine hormonellen Schwankungen. Aus dem Gerinnsel gewonnen – maximale Thrombozyten-Wachstumsfaktoren (PDGF, EGF, TGF-β). EMA/410/01 als bevorzugtes Begleitmaterial.

Lysat aus menschlichen Blutplättchen (hPL)

Xeno-freie Alternative zu FBS für die MSC-Vermehrung und T-Zell-Kultur. Keine tierischen Bestandteile. Höhere MSC-Proliferationsrate als bei FBS. Dokumentation zu GMP verfügbar. EU-Spender-Netzwerk.

FBS Tet-frei <10 ng/ml

Unverzichtbar für die Expression von Tet-On/Tet-Off-induzierbaren CAR-Konstrukten und lentivirale Verpackungssysteme. Tetracyclin-Rückstände bereits im ng/mL-Bereich unterdrücken die Transgeninduktion – die häufigste Ursache für das Scheitern induzierbarer CAR-T-Konstrukte.

FBS Extrem niedriger IgG-Wert <5 µg/ml

Für die T-Zell-Aktivierung in der Forschungsphase, die Entwicklung von ADCC-Assays und die Auswertung von Durchflusszytometrie-Messungen. Rinder-IgG im Standard FBS bindet an den FcγR auf T-Zellen und Antigen-präsentierenden Zellen (APCs) und beeinträchtigt dadurch direkt die CD3/CD28-Aktivierungssignale sowie die ADCC-Messung.

EMA/410/01 – Warum Humanserum der ATMP-Standard ist

Die EMA-Leitlinie EMA/410/01 (Leitlinien zur Verwendung von Rinderserum bei der Herstellung biologischer Humanarzneimittel) rät ausdrücklich von der Verwendung von FBS bei der klinischen Herstellung von ATMP ab. Die Bedenken der Zulassungsbehörden sind zweierlei: FBS führt rinder-xenogene Antigene ein, die expandierte T-Zellen sensibilisieren und nach der Infusion beim Patienten Immunreaktionen gegen Rinder auslösen können, und die Chargenvariabilität von FBS führt zu einer Prozessvariabilität, die bei der Herstellung von GMP nicht akzeptabel ist.

Humanes Serum AB, männlich, rezeptfrei ist der Goldstandard für die Ex-vivo-T-Zell-Expansion bei der Herstellung von CAR-T. Jede Spezifikation ist mechanistisch begründet:

Typ AB: Verhindert die durch Anti-A/B-Antikörper vermittelte Agglutination und Lyse von verbleibenden roten Blutkörperchen in Kulturen zur Vermehrung von Spender-T-Zellen – die Spender-T-Zellen können jeder Blutgruppe angehören.

Nur männliche Spender: Beseitigt hormonbedingte Schwankungen zwischen den einzelnen Chargen, die durch den Menstruationszyklus der Frau bedingt sind. Östrogen und Progesteron beeinflussen die Aktivierungsschwellen der T-Zellen und die Zytokinproduktion – was zu Schwankungen bei der Expansionsausbeute zwischen den einzelnen Produktionsläufen führt.

Off-the-clot: Erhält ein Maximum an thrombozytenabgeleiteten Wachstumsfaktoren (PDGF, EGF, TGF-β, IGF-1), die während der Gerinnungsbildung freigesetzt werden. Diese Faktoren verstärken direkt die Aktivierungssignale der T-Zellen und die Ex-vivo-Expansionsausbeute. Zentrifugierte oder thrombozytenarme Präparate weisen einen deutlich geringeren Gehalt an Wachstumsfaktoren auf.

Bei vollständig xenofreien Protokollen ersetzt rHSA Premium Grade die Albuminzugabe, und humanes Thrombozytenlysat (hPL) ersetzt bei der Expansion von MSCs und bestimmten T-Zellen vollständig das Serum.

Wichtigste Produkte vom Typ ATMP

Humanes Serum AB OTC, männlich — Ex-vivo-Expansion von CAR-T
Humanes Serum AB HI — T-Zell-Aktivierung, QC-ELISpot
Lysat aus menschlichen Blutplättchen (hPL) — Xeno-freie MSC, T-Zell-Expansion
rHSA Premium-Qualität — Xeno-freies Medienzusatzmittel, Kryokonservierung
FBS Tet-frei <10 ng/ml — Induzierbarer CAR, lentivirale Verpackung
FBS Extrem niedriger IgG-Wert <5 µg/ml — Forschung zur T-Zell-Aktivierung, ADCC
FBS Sehr geringer Endotoxingehalt ≤ 1 EU/ml — ELISpot, PBMC-Wirksamkeitstests
FBS ES-Zelle, vorab getestet — iPS-Zellkultur, Reprogrammierung

Wichtige Reagenzien für ATMP-Anwendungen – Vollständige Spezifikationstabelle

Produkt	Klasse / Spezifikation	ATMP-Anwendung	Warum diese Note?
Humanes Serum AB OTC, männlich	Blutgruppe AB, männliche Spender, direkt aus dem Gerinnsel, nativ	CAR-T, TCR-T, Ex-vivo-Expansion von NK-Zellen. Aus iPS-Zellen gewonnene T-Zell-Produkte.	EMA/410/01 wird bevorzugt. Maximale Thrombozyten-Wachstumsfaktoren. Kein Anti-A/B. Keine hormonellen Schwankungen zwischen den Chargen.
Humanes Serum AB HI	Typ AB, durch Erhitzen bei 56 °C für 30 Minuten inaktiviert	T-Zell-Aktivierungsphase (komplementempfindliche Protokolle). PBMC-basierte QC-Wirksamkeitsassays. ELISpot.	Komplement inaktiviert – verhindert die Lyse aktivierter T-Zellen und von PBMC während der Kultivierung und des Assays.
Lysat aus menschlichen Blutplättchen (hPL)	Gezielte, auf Krankheitserreger getestete Spender aus der EU	Xeno-freie MSC-Vermehrung. T-Zell-Vermehrung, bei der ein vollständig xeno-freies Protokoll erforderlich ist. GMP-Übergang bevorzugt, FBS als Alternative.	Keine tierischen Bestandteile. In einigen Protokollen 3–5-mal höhere MSC-Proliferation im Vergleich zu FBS. Entspricht den Anforderungen des EMA-Anhangs I hinsichtlich der Xenofreiheit.
rHSA Premium-Qualität	In Reis exprimiert, Reinheit ≥ 99%, ≤ 1 EU/mg, ISO 13485	Albumin-Zusatz in definierten, xeno-freien T-Zell- oder iPSC-Medien. Formulierungspuffer für die Entnahme und Kryokonservierung von GMP.	Keine Schwankungen bei den Spendern. Kein Risiko durch durch Blut übertragbare Krankheitserreger. Definierte Zusammensetzung. GMP-Dokumentationspaket verfügbar.
FBS Tet-frei <10 ng/ml	Tetracyclin <10 ng/ml – pro Charge geprüft	Induzierbare Expression von Tet-On/Tet-Off-CAR-Konstrukten. Kultivierung lentiviraler Verpackungszelllinien (Tet-regulierbare Verpackungssysteme). Tet-induzierbare AAV-Produktion.	Selbst Rückstände von Tetracyclin im ng/mL-Bereich unterdrücken Tet-responsive Promotoren – die häufigste verborgene Ursache für das Scheitern der induzierbaren Transgenexpression bei der CAR-T-Entwicklung.
FBS Extrem niedriger IgG-Wert <5 µg/ml	IgG < 5 µg/ml – chromatographische Abreicherung	Screening zur T-Zell-Aktivierung in der Forschungsphase. Entwicklung eines Assays zur Bestimmung der ADCC-Wirksamkeit. Durchflusszytometrie mit Fc-Rezeptor-tragenden Zellen. Hybridom-Screening.	Das Standardpräparat FBS enthält 200–800 µg/ml Rinder-IgG, das an FcγR auf T-Zellen und Antigen-präsentierenden Zellen (APCs) bindet – wodurch es die CD3/CD28-Aktivierungssignale direkt stört und die ADCC-Messwerte überdeckt.
FBS Sehr geringer Endotoxingehalt ≤ 1 EU/ml	≤1 EU/ml — pro Charge mittels LAL-Test geprüft	ELISpot-Wirksamkeitstests, PBMC-basierte Freisetzungstests, Funktionsanalysen von NK-Zellen, Monozyten-/Makrophagen-sensitive Primärzellkulturen.	Endotoxin aktiviert Monozyten über TLR4 → unspezifischer IFN-γ/TNF-α-Hintergrund in ELISpot- und Multiplex-Zytokin-Assays – wodurch das antigenspezifische CAR-T-Wirksamkeitssignal überdeckt wird.
FBS ES-Zelle, vorab getestet	Oct4/Sox2/Nanog validiert, <5% spontane Differenzierung pro Charge	iPSC-Reprogrammierung, feederabhängige iPSC-Erhaltung, Bildung von Embryoidkörpern, hämatopoetische Differenzierung von aus iPSC gewonnenen CAR-T-Zellen.	Standard FBS bewirkt eine spontane iPSC-Differenzierung innerhalb von 1–2 Passagen – die Charge wurde nicht auf die Aufrechterhaltung der Pluripotenz geprüft. ES-Zell-vorgetestete Chargen werden vor der Freigabe chargenweise validiert.
FBS, mit Gammastrahlen bestrahlt, ≥ 25 kGy	Gamma-bestrahlt gemäß ISO 11137	Erhöhte virale Sicherheitsmarge für die Herstellung des lentiviralen Vektors ATMP in BSL-2-Einrichtungen. Dokumentation eines zusätzlichen Schritts zur Entfernung von Pathogenen.	Die Gamma-Bestrahlung bietet zusätzlichen Schutz vor einer viralen Kontamination bei FBS – dies ist für die Herstellung viraler Vektoren von Bedeutung, bei der eine Kontamination die Produktsicherheit gefährden würde.

CAR-T-Herstellung – Reagenzienbedarf nach Phase

Phase	Prozessschritt	Produktempfehlung	Grundgedanke
F&E – Prozessentwicklung	T-Zell-Isolierung, Aktivierungsscreening, Vektoroptimierung	FBS Extrem niedriger IgG-Wert <5 µg/ml	Ein niedriger IgG-Spiegel verhindert die FcR-Konkurrenz in T-Zell-Aktivierungsassays – kostengünstig für das Hochdurchsatz-Screening vor der GMP-Differenzierung
F&E → GMP — T-Zell-Aktivierung	CD3/CD28-Stimulation, IL-2-Zugabe, Vorvermehrung	Humanes Serum AB OTC, männlich (oder HI, bei dem das Komplement inaktiviert werden muss)	OTC: maximale Thrombozyten-Wachstumsfaktoren zur Verstärkung des Aktivierungssignals. HI: wenn die Komplementaktivierung während der Stimulation problematisch ist.
GMP – Ex-vivo-T-Zell-Expansion	Großtechnische CAR-T-Expansion in statischen Beuteln oder einem Schwingbioreaktor	Humanes Serum AB OTC, männlich — 5–10%	EMA/410/01 – bevorzugtes Begleitmaterial. Dokumentation gemäß Ph. Eur. 5.2.12 wird auf Anfrage zur Verfügung gestellt. Chargenreservierung für die gesamte Phase-I-Kampagne.
GMP – Erweiterung des Bioreaktors	Skalierung von Schaukelbeuteln (0,5–50 l)	Rocker-Taschen 0,5–200 l	Kompatibel mit Corning und der HyPerforma-Plattform. ISO 13485. Gamma-sterilisiert, ≥ 25 kGy, ISO 11137. Individuelle Anschlusskonfigurationen.
GMP – Xeno-freie / serumfreie Protokolle	Definiertes serumfreies Medium zur T-Zell-Expansion	rHSA Premium-Qualität als Albumin-Ergänzung	Für vollständig xeno-freie GMP-Protokolle. rHSA ersetzt die Albumin-Supplementierung durch eine definierte, chargenkonsistente, tierfreie Alternative.
GMP – Medienaufbereitung und -lagerung	Medienvorbereitung, Pufferherstellung	2D-Einwegbeutel 150 ml–50 l	Geschlossenes System – keine Reinigungsvalidierung. GMP-Dokumentation. Kompatibel mit Sartorius Flexboy. ISO 13485 Deutschland.
GMP – Ernte und Rezeptur	Zellernte, Waschen, Formulierung in Kryomedium	2D-Einwegbeutel + rHSA oder natives HSA in Formulierungspuffer	Geschlossene Umfüllung in gammasterilisierte Beutel. HSA/rHSA als Proteinstabilisator im Formulierungspuffer – verhindert die Adsorption der Zellen an Oberflächen.
Qualitätskontrolle – Freigabetests	Zytotoxizität, ELISpot, ADCC-Potenz-Assay	FBS VLE ≤ 1 EU/ml + Humanes Serum AB HI	VLE FBS zur Hintergrundreduktion bei ELISpot-Assays. Human Serum AB HI für PBMC-basierte Freisetzungsassays, bei denen eine komplementfreie Matrix erforderlich ist.

ATMP-Anforderungen an die Lieferkette – Was SeamlessBio bietet

Die Herstellung von ATMP stellt besondere Anforderungen an die Lieferkette, die sich grundlegend von denen im Forschungsbereich unterscheiden. Ein Wechsel der Reagenziencharge während des Prozesses kann monatelange Arbeit in der Prozessentwicklung zunichte machen und eine vollständige Neuvalidierung des Prozesses erforderlich machen.

Anforderung	SeamlessBio-Lösung	Regulatorische Relevanz
Sammelreservierung	Reservieren Sie eine eigene Charge – von der Prozessentwicklung bis zur klinischen Herstellung. Bis zu 6 Wochen kostenlos während der Evaluierungsphase; Verlängerung der Reservierung für eine vollständige Phase-I/II-Kampagne auf Anfrage.	Prozessvalidierung für GMP – zur Vermeidung einer erneuten Validierung ist die Verwendung derselben Charge während der gesamten Produktionskampagne erforderlich
Erweiterte Chargenprüfung	Mycoplasma, Sterilität, BVDV, HAV, Parvovirus B19; erweiterte Testpanels für adventizielle Erreger sind auf Anfrage über das Liefernetzwerk erhältlich.	ICH Q5A – Virussicherheit biologischer Rohstoffe bei der ATMP-Herstellung
Herkunft aus der EU und Logistik in der EU	Humaner Serum aus der EU, bezogen von Spendezentren, die den Anforderungen der EU-Blutrichtlinie entsprechen. Logistik mit Sitz in Deutschland – Lieferung innerhalb der Kühlkette innerhalb von 24–48 Stunden in die DACH-Region und die EU.	EMA-Anträge nach dem ATMP-Verfahren: Material aus der EU vereinfacht die behördlichen Unterlagen im Vergleich zu Material aus Nicht-EU-Ländern
Ph. Eur. 5.2.12 – Dokumentation	Auf Anfrage vollständige Erklärung gemäß Ph. Eur. 5.2.12 für aus menschlichen Quellen stammende Hilfsstoffe. Konformitätsunterlagen gemäß Eudralex Band 4, Teil IV.	Obligatorisch für aus Menschen gewonnene Hilfsstoffe bei der Herstellung von GMP und ATMP in Phase I/II
Keine Mindestbestellmenge	Von 100 ml für die Validierung bis hin zu Großmengen für die klinische Herstellung – derselbe Lieferant, dieselbe Charge.	Prozesskonsistenz vom Validierungsstadium bis zum klinischen Stadium ohne Lieferantenwechsel
FBS → Unterstützung bei der Umstellung auf Humanserum	Validiertes schrittweises Übergangsprotokoll: 50% FBS/50% Humanserum → 25%/75% → 100% Humanserum über einen Zeitraum von 3 Wochen mit Überwachungsparametern.	Einhaltung der EMA/410/01-Vorgaben – Übergang vom FBS-basierten Forschungsprozess zur Verwendung von Humanserum für die klinische Herstellung

Häufig gestellte Fragen

Warum ist FBS Tet-Free gerade für die Entwicklung von CAR-T von Bedeutung?

Standard FBS enthält Tetracyclinrückstände in einer Konzentration von 10–100 ng/ml, die auf den routinemäßigen Einsatz von Antibiotika in der Rinderhaltung zurückzuführen sind. Die induzierbaren Genexpressionssysteme Tet-On und Tet-Off – die häufig für die induzierbare Expression von CAR-Konstrukten und in lentiviralen Verpackungszelllinien eingesetzt werden – werden bereits durch Tetracyclin-Konzentrationen von nur 1–10 ng/mL unterdrückt. Standard FBS kann die Transgeninduktion in diesen Systemen teilweise oder vollständig unterdrücken, was Forscher zu der falschen Schlussfolgerung verleitet, ihr Konstrukt sei nicht funktionsfähig. FBS Tet-Free <10 ng/mL beseitigt diese Störung und ist die einzig richtige Qualität für jede Tet-regulierte ATMP-Anwendung.

Kann ich das Standardprotokoll FBS für Phase-I/II-Studien nach dem CAR-T-Schema verwenden?

EMA/410/01 rät von der Verwendung von FBS bei der klinischen ATMP-Herstellung ab und verlangt eine ausdrückliche Begründung, falls tierische Hilfsstoffe verwendet werden. Für Phase-I/II-CTA-Einreichungen bei der EMA gelten Humanserum oder definierte xeno-freie Medien als erwarteter Standard. Bei FBS-basierten Verfahren ist mit behördlichen Rückfragen zu rechnen, und es können zusätzliche Unterlagen zu Sicherheitstests hinsichtlich xenogener Sensibilisierung erforderlich sein. Für die Herstellung in der GMP-Phase empfiehlt SeamlessBio den Übergang zu „Human Serum AB OTC Male“. Sofern FBS für nichtklinische Studien oder bestimmte Prozessschritte weiterhin erforderlich ist, muss die FBS-Qualitätsstufe angegeben werden – Standard-FBS ist im ATMP-Kontext nicht zulässig.

Was ist der Unterschied zwischen hPL und Humanserum bei der T-Zell-Expansion?

Humanes Thrombozytenlysat (hPL) wird durch Gefrier-Auftau-Lyse von gepoolten Thrombozyten hergestellt – es setzt eine sehr hohe Konzentration an thrombozytenabgeleiteten Wachstumsfaktoren (PDGF, TGF-β, FGF, EGF, IGF-1) frei, ohne dass dabei Serum-Immunglobuline enthalten sind. hPL ist besonders wirksam für die Expansion von mesenchymalen Stammzellen (MSC) (typischerweise 3–5-mal höhere Proliferationsraten im Vergleich zu FBS) und wurde bereits in xenofreien Protokollen zur T-Zell-Expansion eingesetzt. Human Serum AB OTC Male ist der etablierte Standard für die T-Zell-Expansion mit CAR-T – mit umfangreichen klinischen Validierungsdaten. hPL bietet möglicherweise Vorteile in bestimmten Protokollen, erfordert jedoch eine eigene Prozessvalidierung. Beide sind bei SeamlessBio mit EU-Spenderdokumentation erhältlich.

Wie lange kann ich eine Charge „Human Serum AB OTC Male“ für ein CAR-T-Programm reservieren?

SeamlessBio hält während der Prozessentwicklung und klinischer Produktionskampagnen Chargen von „Human Serum AB OTC Male“ bis zu 6 Monate lang vor – ohne Kosten während der Evaluierungsphase, mit flexiblen Abrufmengen von 100 ml bis hin zu Großmengen. Für die Herstellung von autologem CAR-T in Phase I, für die in der Regel 3–10 Patientenchargen benötigt werden, ist eine Chargenreservierung von 500 ml bis 2 l in der Regel ausreichend. Eine Verlängerung der Reservierung über 6 Monate hinaus ist auf Anfrage für mehrjährige ATMP-Entwicklungsprogramme möglich.

Welche Unterlagen stellt SeamlessBio für EMA-ATMP-Einreichungen zur Verfügung?

Für Human-Serum-AB-Produkte: CoA, Ursprungszeugnis (gemäß der EU-Blutrichtlinie zugelassene Spendezentren), Virus-Testpanel pro Charge (HIV-1/2 NAT, HBV NAT, HCV NAT, CMV, EBV, Parvovirus B19), Ph. Eur. 5.2.12-Erklärung auf Anfrage sowie Konformitätsunterlagen gemäß Eudralex Band 4 Teil IV. Für FBS-Spezialqualitäten: CoA, CoO, TSE/BSE-Erklärung gemäß EMA CHMP/BWP, Mykoplasmen-Testung, BVDV-Testung, gegebenenfalls Zertifikat über die Gamma-Bestrahlung. Das vollständige Dokumentationspaket wird pro Charge zusammengestellt und jeder Lieferung beigelegt.

Ist menschliches Thrombozytenlysat (hPL) für die Vermehrung von MSCs in klinischer Qualität geeignet?

Ja – hPL ist von der EMA für die Vermehrung von MSCs in klinischer Qualität zugelassen und wird in mehreren veröffentlichten GMP-Protokollen zur Herstellung von MSCs genannt. Der Ausschuss für fortgeschrittene Therapien (CAT) der EMA hat hPL als xeno-freie Alternative zu FBS bei der MSC-basierten ATMP-Herstellung geprüft. SeamlessBio liefert hPL aus gepoolten EU-Spenderthrombozyten mit vollständiger Dokumentation des Pathogen-Screenings (HIV, HBV, HCV, Parvovirus B19, CMV, EBV) sowie Tests zur Chargenkonsistenz. Für klinische Anwendungen empfehlen wir, zusätzlich zum Standard-CoA chargenspezifische Daten zu Wachstumsförderungstests anzufordern.

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Batch-Reservierung und GMP-Dokumentation für ATMP-Programme

Reservieren Sie eine validierte Charge von „Human Serum AB OTC Male“ für Ihr vollständiges Phase-I/II-Programm nach dem CAR-T- oder ATMP-Schema. Ein vollständiges Dokumentationspaket gemäß Ph. Eur. 5.2.12 und Eudralex Band 4, Teil IV steht zur Verfügung. Kostenlose Testproben für die Prozessentwicklung. EU-konforme Kühlkettenlieferung in die DACH-Region und die EU innerhalb von 24–48 Stunden.
E-Mail: info@seamlessbio.de | +49 851 37932226