Was ist ein ATPase-Assay für ABC-Transporter?

Wann ATPase, wann andere Methoden?

ATPase ist am wertvollsten für: das Screening großer Substanzserien (50–500 Substanzen) in der frühen Forschung, wenn P-gp- und BCRP-Interaktionspotenzial schnell gerankt werden müssen; die vorläufige Hit-Identifizierung vor vesikulären Transportassays; und als ergänzende Daten in regulatorischen Einreichungen.

NICHT allein verwenden: FDA und EMA akzeptieren ATPase-Daten nicht als alleinigen DDI-IC50-Nachweis; nicht zuverlässig für BSEP, MRP2, MRP3, MRP4, bei denen die Substratstimulation schwankt; nicht für die klinische DDI-Vorhersage ohne Bestätigung im vesikulären Transportassay.

Wichtige Fakten

• Prinzip: ABC-Transporter hydrolysieren ATP → Pi wird freigesetzt → Messung per kolorimetrischem Molybdat-/Malachitgrün-Assay
• Vanadat-sensitive ATPase: Natriumorthovanadat hemmt spezifisch die ATPase von ABC-Transportern – vanadat-sensitives Pi = spezifische Transporteraktivität
• Durchsatz: sehr hoch – kolorimetrisch, 96-/384-Well-Platten, Ergebnisse am selben Tag, außer einem Plattenleser keine Spezialgeräte
• Substratidentifikation: Stimulation der basalen ATPase über den Hintergrund = mögliches Substrat
• Inhibitoridentifikation: Senkung der stimulierten ATPase = möglicher Inhibitor
• Einschränkung: nicht linearer Zusammenhang zwischen ATPase-Aktivität und Transportrate – nicht allein für regulatorische DDI-Einreichungen geeignet
• Bester Einsatz: Hochdurchsatz-Screening in der Frühphase, um Substanzserien vor der Bestätigung im vesikulären Transportassay zu ranken

Weiterlesen

• Was ist ein vesikulärer Transportassay?
• Vesikulärer vs. zellbasierter vs. ATPase-Assay
• Was ist ein ABC-Transporter?

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