Humanes BSEP-Vesikel-Kit (aus HEK293)

Warum wird die BSEP-Inhibition anders bewertet als andere DDI-Transporter wie P-gp oder BCRP?

Anders als bei P-gp und BCRP – wo Substrat- und Inhibitorstatus des Prüfpräparats bewertet werden – konzentriert sich die regulatorische BSEP-Bewertung vor allem auf die Inhibition. Der Grund ist die sehr spezifische physiologische Rolle von BSEP: Er ist der dominierende kanalikuläre Efflux-Transporter für konjugierte Gallensalze in Hepatozyten, und seine Hemmung durch ein Arzneimittel führt zur intrazellulären Anreicherung von Gallensäuren und damit zu cholestatischen Leberschäden (DILI). Ein Arzneimittel ist selten selbst BSEP-Substrat; klinisch relevant ist, ob es den BSEP-vermittelten Gallensäure-Efflux bei Patienten hemmt. Die Leitlinien von FDA (2017) und EMA (2013) empfehlen daher die Bestimmung der IC₅₀ der BSEP-Inhibition im vesikulären Transportassay mit Taurocholat als Sondensubstrat als primäres In-vitro-Screening auf das DILI-Risiko.

Welches Sondensubstrat wird für vesikuläre BSEP-Inhibitionsassays verwendet?

Taurocholat (TCA, Taurocholsäure) ist das Standard-Sondensubstrat für vesikuläre BSEP-Transportassays und wird in den meisten regulatorischen DDI-Studien radioaktiv markiert (³H-Taurocholat) eingesetzt. Taurocholat ist eine primäre konjugierte Gallensäure, ein physiologisches BSEP-Substrat und wird in den Leitlinien von FDA und EMA als Referenzsonde genannt. Taurolithocholat-3-sulfat (TLCS) dient als alternatives Sondensubstrat, wenn das Taurocholat-Transportsignal nicht ausreicht. Für die Fluoreszenzdetektion gibt es fluoreszierende Gallensäure-Analoga, die mit dem Assayformat von Cell4Pharma kompatibel sind. Das Kit ist mit allen gängigen Sondensubstraten und Detektionsmethoden kompatibel.

Ab welcher IC₅₀ gilt eine BSEP-Inhibition als klinisch relevant?

Die Zulassungsbehörden legen keinen festen IC₅₀-Grenzwert für die BSEP-Inhibition fest; die Daten werden vielmehr im Verhältnis der hepatischen Gesamtkonzentration des Wirkstoffs zur gemessenen IC₅₀ interpretiert. Ein häufig angewandtes Risikomodell (Dawson et al., Toxicol Sci 2012) stuft IC₅₀-Werte unter 25 µM bei Wirkstoffen mit hepatischer Exposition als potenziell relevant ein, besonders in Verbindung mit klinischen cholestatischen Signalen oder erhöhter AP/Bilirubin in präklinischen Studien. Das entscheidende regulatorische Ergebnis ist der IC₅₀-Wert und das Verhältnis von systemischer zu hepatischer Exposition – kein binäres Bestanden/Nicht bestanden. Das BSEP-Kit von Cell4Pharma ermöglicht eine präzise IC₅₀-Bestimmung über den gesamten Konzentrationsbereich, also genau das Datenformat, das in DILI-Risikodossiers für NDA/MAA-Anträge erwartet wird.

Gibt es BSEP-Vesikel-Kits für Katze und Hund, und wann werden sie gebraucht?

Ja – Cell4Pharma bietet neben dem humanen Kit auch BSEP-Vesikel-Kits für Katze und Hund an, über SeamlessBio auf Anfrage erhältlich. Vergleichende BSEP-Inhibitionsstudien über Spezies hinweg werden in zwei Szenarien eingesetzt: erstens in der Sicherheitsbewertung von Tierarzneimitteln, wenn die Zielspezies ein Heimtier ist und humane BSEP-Daten allein nicht ausreichen; zweitens bei der präklinischen Speziesübertragung des DILI-Risikos, wenn abweichende cholestatische Signale bei Ratte und Hund durch einen direkten Speziesvergleich der BSEP-Hemmpotenz untersucht werden. Aminosäuresequenz und Substratspezifität von BSEP unterscheiden sich zwischen Spezies, sodass humane IC₅₀-Werte die Empfindlichkeit von Hunde- oder Katzen-BSEP nicht immer vorhersagen – speziesspezifische Kits sind dann das richtige Werkzeug.

Lässt sich das BSEP-Vesikel-Kit als Teil eines umfassenderen ABC-Transporter-DDI-Panels einsetzen?

Ja – BSEP wird routinemäßig als Teil eines vollständigen hepatischen Transporter-DDI-Panels zusammen mit P-gp (ABCB1), BCRP (ABCG2) und MRP2 (ABCC2) bewertet. Während P-gp, BCRP und MRP2 auf Substrat- und Inhibitorpotenzial des Prüfpräparats untersucht werden, wird BSEP nur auf Inhibition geprüft. Das ABC-Transporter-Vesikel-Kit-Sortiment von Cell4Pharma – P-gp, BCRP, BSEP, MRP1, MRP2, MRP5 – nutzt ein gemeinsames Assayformat und Puffersystem, erlaubt die parallele Bearbeitung im selben Versuch und verkürzt die Assay-Entwicklung. Das Humane Kontrollvesikel-Kit (C4PVK009) dient als einheitliche passende Negativkontrolle für alle Transporterassays im Panel. Alle Kits sind für die DACH-Region über SeamlessBio erhältlich.