Humanes BCRP-Vesikel-Kit (aus HEK293)

Ist eine Bewertung von BCRP für Zulassungsanträge bei FDA und EMA vorgeschrieben?

Ja. BCRP (ABCG2) gehört zu den Transportern, für die die FDA Drug Interaction Guidance (2017) und die EMA-Leitlinie zur Untersuchung von Arzneimittelwechselwirkungen (2013) eine In-vitro-Bewertung als Teil des Standard-DDI-Antragspakets verlangen. Beide Behörden empfehlen den vesikulären Transportassay mit BCRP-überexprimierenden Inside-out-Membranvesikeln als primäre Methode, um zu bestimmen, ob eine neue Wirkstoffsubstanz BCRP-Substrat oder -Inhibitor ist. Positive Befunde führen auf Basis von R-Wert-Berechnungen zu weiteren Empfehlungen für klinische DDI-Studien.

Was bedeutet das garantierte ATP/AMP-Verhältnis > 10, und warum ist es wichtig?

Das ATP/AMP-Verhältnis im vesikulären Transportassay setzt den ATP-abhängigen Transport (in Gegenwart von ATP) ins Verhältnis zum Hintergrund in Gegenwart von AMP. Ein Verhältnis > 10 für ein validiertes BCRP-Sondensubstrat (meist Estron-3-sulfat) bestätigt, dass die Vesikel funktionell aktiv sind und ATP-getriebenen Efflux-Transport leisten. Dieser QC-Richtwert belegt, dass die Vesikelpräparation für Assayarbeiten in regulatorischer Qualität geeignet ist. Ohne bestätigtes ATP/AMP-Verhältnis lassen sich Transportdaten nicht zuverlässig interpretieren oder in DDI-Dossiers einreichen.

Welche Sondensubstrate und Inhibitoren werden für vesikuläre BCRP-Transportassays empfohlen?

Das meistverwendete Sondensubstrat für vesikuläre BCRP-Transportassays ist Estron-3-sulfat (E1S): gut charakterisiert, radioaktiv markiert (³H-E1S) im Handel erhältlich und in den Leitlinien von FDA und EMA genannt. Methotrexat und Prazosin dienen als alternative Substrate. Als Positivkontrollen für die Inhibition sind Ko143 und Fumitremorgin C (FTC) die Referenz-BCRP-Inhibitoren; Elacridar (GF120918) wird eingesetzt, wenn eine duale P-gp/BCRP-Inhibition relevant ist. Das Kit von Cell4Pharma ist mit allen gängigen Sondensubstraten und Detektionsmethoden kompatibel (Radiolabel, Fluoreszenz, LC-MS/MS).

Lässt sich das BCRP-Vesikel-Kit zusammen mit anderen ABC-Transporter-Kits in einem Multitransporter-DDI-Panel einsetzen?

Ja – das ist Standardpraxis in der Arzneimittelentwicklung. Zulassungsbehörden erwarten ein vollständiges Transporter-DDI-Paket; BCRP wird meist parallel mit P-gp (ABCB1) und BSEP (ABCB11) bewertet, bei klinisch relevantem hepatischem Efflux ergänzt um MRP2 (ABCC2). Cell4Pharma bietet ein vollständiges Sortiment an ABC-Transporter-Vesikel-Kits (P-gp, BSEP, MRP1, MRP2, MRP5, BCRP) mit gemeinsamem Assayformat und Puffersystem für die parallele Bearbeitung im selben Versuch. Das Humane Kontrollvesikel-Kit (C4PVK009) dient als Negativkontrolle für alle Vesikelassays im Panel.

Was ist die empfohlene Negativkontrolle für den vesikulären BCRP-Transportassay?

Das Humane Kontrollvesikel-Kit (C4PVK009) von Cell4Pharma ist die empfohlene Negativkontrolle. Die Kontrollvesikel werden unter denselben Bedingungen wie die BCRP-überexprimierenden Vesikel aus HEK293-Zellen hergestellt, jedoch ohne Transfektion des Transporters – so lässt sich der ATP-abhängige Transport mit und ohne BCRP direkt vergleichen. Passende Kontrollvesikel sind nötig, um BCRP-spezifischen Transport zu bestätigen und unspezifische Bindung sowie passive Aufnahme in die Vesikelpräparation zu korrigieren. Das BCRP-Kit und das Kontrollvesikel-Kit sind für die DACH-Region über SeamlessBio erhältlich.