Humanes Pgp-Vesikel-Kit (aus HEK293)

Ist eine Bewertung von P-gp (ABCB1) für Zulassungsanträge bei FDA und EMA vorgeschrieben?

Ja. P-Glykoprotein (P-gp / MDR1 / ABCB1) gehört zu den Transportern, für die die FDA Drug Interaction Guidance (2017) und die EMA-Leitlinie zur Untersuchung von Arzneimittelwechselwirkungen (2013) eine In-vitro-Bewertung als Teil des Standard-DDI-Antragspakets für neue Wirkstoffsubstanzen (NME) in der klinischen Entwicklung verlangen. Beide Behörden empfehlen den vesikulären Transportassay mit P-gp-überexprimierenden Inside-out-Membranvesikeln als primäre In-vitro-Methode zur Bestimmung des Substrat- und Inhibitorstatus. Positive Befunde lösen eine weitere Bewertung auf Basis von R-Wert-Berechnungen aus, die vor dem NDA- oder MAA-Antrag klinische DDI-Studien mit Referenzinhibitoren (z. B. Rifampicin, Itraconazol) erfordern kann.

Was ist der Unterschied zwischen dem Standard-P-gp-Kit (C4PVK010) und der FluoPgp-Variante (C4PVK011)?

C4PVK010 ist das Standard-Kit für vesikulären Transport und mit allen Detektionsmethoden kompatibel – radioaktiv markierte Substrate (³H-Digoxin, ¹⁴C-NMQ), unmarkierte Substrate mit LC-MS/MS-Quantifizierung und fluoreszierende Substrate. C4PVK011 ist eine Variante desselben Kits, die zusätzlich das neue fluoreszierende FluoPgp-Substrat enthält. Damit lässt sich der P-gp-Transport per Fluoreszenz messen – ohne Radioisotopenmarkierung, Entsorgung radioaktiver Abfälle oder Flüssigszintillationszähler. C4PVK011 eignet sich besonders für Labore ohne Umgangsgenehmigung für Isotope oder für Hochdurchsatz-Screenings, bei denen Fluoreszenz-Plattenreader bevorzugt werden. Beide Kits verwenden dieselbe P-gp-Vesikelpräparation und eignen sich zur Erzeugung regulatorischer DDI-Daten.

Welche Sondensubstrate und Inhibitoren werden für vesikuläre P-gp-Transportassays empfohlen?

Die meistverwendeten Sondensubstrate für vesikuläre P-gp-Transportassays sind Digoxin (³H-Digoxin) und N-Methylchinidin (NMQ); beide werden in den Leitlinien von FDA und EMA als validierte P-gp-Sondensubstrate genannt. Convallatoxin dient als alternatives Sondensubstrat. Als Positivkontrolle für die Inhibition ist Elacridar (GF120918) der duale P-gp/BCRP-Referenzinhibitor; Verapamil und Tariquidar werden als P-gp-selektive Inhibitoren in Konzentrations-Wirkungs-Studien eingesetzt. Das Kit von Cell4Pharma ist mit allen gängigen Sondensubstraten und Detektionsmethoden kompatibel, einschließlich des fluoreszierenden FluoPgp-Substrats in C4PVK011.

Lässt sich das P-gp-Vesikel-Kit in einem Multitransporter-DDI-Panel zusammen mit BCRP und BSEP einsetzen?

Ja – das ist die Standardpraxis in der regulatorischen Arzneimittelentwicklung. FDA und EMA erwarten einen vollständigen Transporter-DDI-Datensatz zum klinischen Dossier; P-gp wird dabei stets parallel mit BCRP (ABCG2) und BSEP (ABCB11) bewertet, bei Substanzen mit relevantem hepatischem oder intestinalem Efflux ergänzt um MRP2 (ABCC2). Das gesamte ABC-Transporter-Vesikel-Kit-Sortiment von Cell4Pharma – P-gp, BCRP, BSEP, MRP1, MRP2, MRP5 – nutzt ein gemeinsames Assayformat und Puffersystem und erlaubt so die parallele Bearbeitung im selben Versuch. Das Humane Kontrollvesikel-Kit (C4PVK009) dient als einheitliche Negativkontrolle für alle Transporterassays im Panel.

Was ist die empfohlene Negativkontrolle für vesikuläre P-gp-Transportassays?

Das Humane Kontrollvesikel-Kit (C4PVK009) von Cell4Pharma ist die empfohlene Negativkontrolle für P-gp-Transportassays. Die Kontrollvesikel werden unter identischen Bedingungen wie die P-gp-überexprimierenden Vesikel aus HEK293-Zellen hergestellt, jedoch ohne Transfektion des Transporters – so lässt sich der ATP-abhängige Transport mit und ohne P-gp direkt vergleichen. Das bestätigt, dass die beobachtete Aufnahme P-gp-spezifisch ist und nicht auf unspezifische Bindung, passive Aufnahme oder endogene Transporteraktivität zurückgeht. Passende Kontrollvesikel sind für die Interpretation von Daten in regulatorischer Qualität erforderlich. Das P-gp-Kit und das Kontrollvesikel-Kit sind für die DACH-Region über SeamlessBio erhältlich.