Was ist Tet-freies FBS?

Warum Standard-FKS Tet-Systeme stört

Tetracycline in Standard-FKS stammen aus Futterzusätzen und Tierarzneimitteln. Spuren (1–100 ng/ml) bleiben nach der Verarbeitung erhalten. In einem Tet-On-System, in dem Doxycyclin in 10–1.000 ng/ml die Transgenexpression steuert, verursachen bereits 10 ng/ml Hintergrund aus dem FKS eine Teilaktivierung – die nicht induzierte Kontrolle wird unzuverlässig, das Verhältnis von Hintergrund zu Induktion schlecht.

Undichte Tet-Systeme durch FKS diagnostizieren

Zeigt Ihre Tet-On-Zelllinie im nicht induzierten Zustand Expression, ersetzen Sie testweise Ihr aktuelles FKS durch Tet-freies FKS. Sinkt die Hintergrundexpression, war eine Tetracyclin-Kontamination des FKS die Ursache – einer der häufigsten Befunde bei der Fehlersuche in induzierbaren Expressionssystemen.

Wichtige Fakten

• Standard-FKS kann Spuren von Tetracyclinen aus dem Futter enthalten – typischerweise 1–100 ng/ml
• Tet-On-Systeme werden mit Doxycyclin in 10–1.000 ng/ml induziert – Tetracyclinspuren aus dem FKS verursachen eine deutliche Hintergrundaktivierung
• Tet-Off-Systeme werden durch Tetracyclin unterdrückt – Tetracyclinspuren aus dem FKS unterdrücken die Expression auch ohne zugesetzten Effektor teilweise
• Tet-freies FKS per HPLC oder Bioassay geprüft – Tetracyclin und Doxycyclin nachweislich unter der Nachweisgrenze
• In derselben Konzentration wie Standard-FKS (10 %) eingesetzt – direkter Ersatz, für die meisten Zelllinien keine Adaption nötig
• Außerdem erforderlich für: CRISPR-Screenings mit doxycyclin-induzierbaren Guides, shRNA-Knockdown-Systeme, tet-responsive Schaltkreise der synthetischen Biologie

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