Kurzdefinition
Was ist normales Ziegenserum (NGS)? Normales Ziegenserum (NGS) ist Serum gesunder Ziegen, das in IHC und IF als Blockierreagenz dient, wenn die Sekundärantikörper in der Ziege hergestellt wurden. Es sättigt unspezifische Fc-Rezeptor-Bindungsstellen im Gewebeschnitt, bevor der Sekundärantikörper aufgetragen wird, und senkt so das Hintergrundsignal.
Wann Sie NICHT mit Ziegenserum blocken sollten
Verwenden Sie nie normales Ziegenserum, wenn Ihr Primärantikörper in der Ziege hergestellt wurde. Das Ziegen-IgG im Serum wird vom Anti-Ziege-Sekundärantikörper genauso erkannt wie Ihr Primärantikörper – das erzeugt starken Hintergrund und verfälscht das Signal. Verwenden Sie in diesem Fall Blockierserum einer anderen Spezies (Pferdeserum ist eine gängige Alternative).
NGS vs. NDS bei Mehrfachfärbungen
Für IHC mit Einfachmarkierung und Ziegen-Sekundärantikörper ist NGS richtig. Bei Mehrfachmarkierungen in der IF mit Primärantikörpern aus Kaninchen, Maus und Ziege erlaubt der Wechsel auf ausschließlich im Esel hergestellte Sekundärantikörper einen einzigen Blockierschritt mit normalem Eselserum (NDS) – das vereinfacht das Protokoll deutlich.
Wichtige Fakten
- Eingesetzt, wenn der Sekundärantikörper in der Ziege hergestellt wurde – z. B. Ziege-Anti-Kaninchen-HRP, Ziege-Anti-Maus-AF488
- Spezies-Regel: Spezies des Blockierserums = Wirtsspezies des Sekundärantikörpers
- 5–10 % NGS in PBS für 30–60 min – nach der Antigendemaskierung, vor dem Primärantikörper
- Nach dem Blocken nicht waschen – Überschuss abtropfen lassen und Primärantikörper direkt in 1–5 % NGS/PBS auftragen
- NGS darf nicht verwendet werden, wenn der Primärantikörper in der Ziege hergestellt wurde – der Sekundärantikörper würde das Ziegen-IgG im Blockierserum erkennen
- Erhältlich bei SeamlessBio: 50 ml, 100 ml, 500 ml; hitzeinaktiviert auf Anfrage
Weiterlesen
SeamlessBio GmbH · Passau, Deutschland · info@seamlessbio.de
English 
Deutsch