Kurzdefinition
Was ist hitzeinaktiviertes FKS? Hitzeinaktiviertes FKS (HI-FKS) ist fetales Kälberserum, das 30 Minuten auf 56 °C erhitzt wurde, um die Komplementproteine zu zerstören. Es wird in Zellkulturanwendungen eingesetzt, in denen aktives Komplement Zellen lysieren oder Assayergebnisse stören würde.
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Was entfernt die Hitzeinaktivierung?
Die Hitzeinaktivierung zerstört gezielt das Komplementsystem – eine Kaskade aus ~30 Serumproteinen, die gemeinsam fremde Zellen über den Membranangriffskomplex (MAC) lysieren. In der Zellkultur kann bovines Komplement humane Zellen (besonders Lymphozyten und andere Immunzellen) unspezifisch lysieren oder Virusneutralisationsassays stören, in denen eine komplementabhängige Neutralisation zur antikörperabhängigen hinzukäme.
Wann wird HI-FKS benötigt?
- Embryokultur (IVF): HI-FKS mit 5–10 % ist Standard für die Embryokultur bei Rind, Pferd und Schwein – Komplementaktivität kann Blastomeren schädigen
- PBMC- und Immunzellassays: Humane Lymphozyten reagieren empfindlich auf Lyse durch bovines Komplement – HI-FKS verwenden oder auf humanes AB-Serum umsteigen
- Virusneutralisationsassays: Verhindert, dass eine komplementabhängige Neutralisation die antikörpervermittelte Neutralisation verfälscht
- Mykoplasmenfreie Kultur: Hitzeinaktivierung tötet Mykoplasmen NICHT ab – stattdessen PCR-getestetes FKS verwenden
Wann wird HI-FKS NICHT benötigt?
Für die routinemäßige Kultur von Säugerzelllinien (HeLa, A549, CHO, HEK293, MCF-7) ist die Hitzeinaktivierung unnötig und senkt die wachstumsfördernde Wirkung leicht. Für die allgemeine Zellkultur ist Standard-FKS vorzuziehen.
Wichtige Fakten
- Die Hitzeinaktivierung erfolgt bei genau 56 °C für 30 Minuten – höhere Temperaturen oder längere Zeiten denaturieren Albumin und Wachstumsfaktoren und senken die biologische Aktivität
- Hauptziel sind die Komplementproteine (C1q, C3, C4, C5) – die klassische Komplementkaskade ist hitzelabil und wird bei 56 °C inaktiviert
- Die Hitzeinaktivierung entfernt NICHT: Endotoxin, IgG, Mykoplasmen, Viren, Wachstumsfaktoren (geringe Abnahme) oder Albumin
- HI-FKS ist Standard für: Embryokultur (IVF bei Rind, Pferd, Schwein), PBMC-Assays, Virusneutralisationsassays und jede Anwendung, in der eine komplementvermittelte Lyse der Zielzellen die Ergebnisse verfälschen würde
- Die Hitzeinaktivierung senkt die wachstumsfördernde Wirkung leicht – manche Zelllinien wachsen in HI-FKS langsamer als in Standard-FKS
- Für die meisten Routinekulturen nicht nötig – nur einsetzen, wenn Komplementaktivität für Ihren Assay nachweislich ein Problem ist
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