Kurzdefinition
Was ist normales Eselserum (NDS)? Normales Eselserum (NDS) ist Serum gesunder Esel, das in IHC und IF als Blockierreagenz dient, wenn die Sekundärantikörper im Esel hergestellt wurden. Es ist das am häufigsten verwendete Blockierserum bei Mehrfachmarkierungen in der Immunfluoreszenz, weil die meisten kommerziellen kreuzadsorbierten Sekundärantikörper-Panels im Esel hergestellt werden.
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Warum Eselserum zum Standard für Mehrfach-IF wurde
Werden mehrere Primärantikörper aus verschiedenen Wirtsspezies gleichzeitig eingesetzt (z. B. Maus-Anti-CD3 + Kaninchen-Anti-Ki67 + Ziege-Anti-CK5), muss jeder Sekundärantikörper eine andere Primärspezies erkennen, ohne mit den anderen zu kreuzreagieren. Im Esel hergestellte Sekundärantikörper (Esel-Anti-Maus, Esel-Anti-Kaninchen, Esel-Anti-Ziege) gibt es gegen alle gängigen Spezies vorabsorbiert – damit deckt der Esel als einzige Spezies alle Primärwirte mit einem NDS-Blockierschritt ab.
NDS-Blockierprotokoll
- Nach der Antigendemaskierung überschüssigen Puffer abtropfen lassen
- 5–10 % NDS in PBS auftragen, 200–300 µl pro Schnitt
- 30–60 min bei Raumtemperatur inkubieren
- Abtropfen lassen (nicht waschen) – Primärantikörper in 1–5 % NDS/PBS auftragen
Wichtige Fakten
- Spezies-Regel: Die Spezies des Blockierserums muss der Spezies entsprechen, in der der Sekundärantikörper hergestellt wurde
- Ist der Sekundärantikörper Esel-Anti-Kaninchen-AF488 → Blockierserum muss normales Eselserum (NDS) sein
- NDS ist der Standard für Mehrfach-IF, weil die meisten kommerziellen kreuzadsorbierten Sekundärantikörper im Esel hergestellt werden
- Bei Mehrfachmarkierung mit 3–4 Primärantikörpern: Sekundärantikörper einer Spezies (Esel) + ein NDS-Blockierschritt – das einfachste Protokoll
- Empfohlen: 5–10 % NDS in PBS, 30–60 Minuten bei Raumtemperatur, vor dem Primärantikörper nicht waschen
- Erhältlich bei SeamlessBio: 50 ml, 100 ml, 500 ml; hitzeinaktiviert auf Anfrage
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