Die FDA-Leitlinien zu Arzneimittelwechselwirkungen aus dem Jahr 2020 schreiben für alle neuen Wirkstoffe (NMEs) eine Bewertung von P-gp, BCRP, OATP1B1, OATP1B3, OCT1, OCT2, OAT1, OAT3, MATE1 und MATE2K vor. Eine BSEP-Bewertung wird für alle NMEs als Teil der Risikobewertung hinsichtlich Hepatotoxizität empfohlen. Der Membranvesikel-Assay ist die anerkannte Methode für Transporter der P-gp-, BCRP-, BSEP- und MRP-Familie. Die Anforderungen der EMA-Leitlinie zu Arzneimittelwechselwirkungen (DDI) aus dem Jahr 2012 sind über ICH M12 (2023) weitgehend mit der FDA-Liste harmonisiert.

Kontrollvesikel aus nicht transfizierten HEK293-Zellen sind für die Hintergrundkorrektur in allen Vesikel-Assays unerlässlich. Sie dienen zur Messung der unspezifischen ATP-abhängigen Aufnahme und der passiven Substrakakkumulation ohne den zu untersuchenden Transporter. ATP-abhängiger Transport = (Signal in Transportervesikeln) − (Signal in Kontrollvesikeln). Ohne diese Subtraktion sind die IC₅₀-Werte unzuverlässig und entsprechen nicht den Leitlinien der FDA/EMA. Jedes Assay-Protokoll der Cell4Pharma-Vesikel-Kits legt die Verwendung von Kontrollvesikeln fest.

Eine Hemmung von BSEP allein ist zwar notwendig, reicht jedoch nicht immer aus, um eine klinische DILI vorherzusagen. Eine gleichzeitige Hemmung von BSEP und MRP2 oder MRP3 beeinträchtigt sowohl den primären kanalikulären Gallensäureausflussweg als auch das kompensatorische basolaterale Sicherheitsventil – was zu einer dramatischen Zunahme der intrazellulären Gallensäureakkumulation und des Hepatotoxizitätsrisikos führt. Die Untersuchung des vollständigen BSEP/MRP2/MRP3/MRP4-Panels liefert ein genaueres DILI-Risikoprofil als die Untersuchung von BSEP allein und wird von den FDA-Prüfern im Rahmen der IND-Prüfung zunehmend erwartet.

Das Standard-P-gp-Vesikel-Kit verwendet ein radioaktiv markiertes Substrat (Vinblastin) – das als Goldstandard bei Zulassungsanträgen anerkannt ist. Das FluoPgp-Kit verwendet ein fluoreszierendes Substrat, das mit der Standard-Detektion mittels Plattenlesegerät kompatibel ist, ohne dass eine radiochemische Infrastruktur erforderlich ist. Beide Kits liefern gleichwertige IC₅₀-Werte für Referenzinhibitoren. Für behördliche IND-Unterlagen werden beide Formate von der FDA und der EMA akzeptiert, sofern sie mit den erforderlichen Qualitätskontrolldaten und der Validierung der Referenzinhibitoren einhergehen.

Die meisten Anbieter von Vesikel-Kits haben ihren Sitz in den USA – was zu einer transatlantischen Lieferzeit von 7–14 Tagen, Risiken für die Kühlkette, Verzögerungen beim Zoll und Lücken im Support aufgrund unterschiedlicher Zeitzonen führt. Cell4Pharma-Kits über SeamlessBio werden aus dem EU-Lager in Passau versandt: 2–5 Werktage in die DACH-Region, 3–7 Tage in die übrige EU, gleiche Kühlkette, keine Einfuhrpapiere. Für CRO- und Pharmateams, die nach IND-Fristen arbeiten, ist dieser Unterschied in der Lieferzuverlässigkeit von großer Bedeutung. Deutschsprachige Dokumentation für EMA-Einreichungen verfügbar.