Kreuzreaktivitätstests gehören zu den am schlechtesten ausgestatteten Teilen der IVD-Leistungsbewertung – bis die Benannte Stelle zwei Wochen vor Ihrer Einreichungsfrist fehlende Daten bemängelt. Dieser Beitrag liefert eine praktische Checkliste der Disease-State-Serumpanels, die für die IVDR-Leistungsbewertung üblicherweise benötigt werden, geordnet nach Assaytyp – damit Sie Ihren Beschaffungszeitplan richtig planen.

Warum Kreuzreaktivitätstests für die IVDR wichtig sind

Ein IVD, das positive und negative Proben gesunder Spender oder bestätigt positiver Patienten richtig erkennt, funktioniert nicht automatisch in einer klinischen Population. Patienten haben selten nur eine Erkrankung – sie haben Begleiterkrankungen, gleichzeitige Infektionen, erhöhte Entzündungsmarker, ungewöhnliche Antikörperprofile und Stoffwechselstörungen, die mit der Assaychemie wechselwirken und falsch-positive oder veränderte quantitative Ergebnisse erzeugen können.

Die IVDR-Leistungsbewertung nach EU-Verordnung 2017/746 verlangt den Nachweis, dass das Produkt in allen Situationen, denen es in der Zielpopulation begegnet, wie vorgesehen funktioniert. Bei einem Schilddrüsenassay für ein allgemeines klinisches Labor gehören dazu Patienten mit Autoimmunerkrankungen, Fettstoffwechselstörungen und gleichzeitigen Infektionen – die alle Immunoassays stören können.

Das allgemeine Interferenzpanel – hier beginnen

Bevor Sie Ihr krankheitsspezifisches Kreuzreaktivitätspanel aufbauen, sollte jede IVD-Leistungsbewertung ein allgemeines Interferenzpanel mit den häufigsten Quellen unspezifischer Störungen in Immunoassays enthalten:

Störsubstanz	Mechanismus	Typische Prüfkonzentration
Rheumafaktor (RF)	IgM-Anti-IgG – verbrückt in Sandwich-Assays murine Fänger- und Detektionsantikörper	Hoch positiv – >500 IE/ml
Antinukleäre Antikörper (ANA)	Unspezifische Antikörperbindung an Assaykomponenten	ANA-positiv, Titer >1:160
HAMA (humane Anti-Maus-Antikörper)	Verbrücken murine Antikörper im Sandwich-Format – falsch-positives Signal	Hoch positiv >100 ng/ml
Lipämie	Optische Störung, Verdrängung aus der Proteinbindung	Triglyceride >1.000 mg/dl
Ikterus (Bilirubin)	Optische Störung bei den Detektionswellenlängen	Bilirubin >20 mg/dl
Hämolyse	Optische Störung durch Hämoglobin, freigesetzte intrazelluläre Enzyme	Hämoglobin >500 mg/dl
Biotin (Vitamin B7)	Konkurriert in Streptavidin-Biotin-basierten Assays mit biotinylierten Assaykomponenten	>1.000 ng/ml – bei Einnahme von Nahrungsergänzungsmitteln
Polyklonale Hypergammaglobulinämie	Erhöhtes Gesamt-IgG verursacht unspezifischen Hintergrund	Gesamt-IgG >30 g/l

Checkliste Kreuzreaktivität nach Assaytyp

Assays für Infektionskrankheiten (HIV, HBV, HCV)

Die Kreuzreaktivitätstests für Infektionsassays werden weitgehend durch die GTS 2009/108/EG festgelegt. Über das allgemeine Interferenzpanel hinaus gehören dazu:

Koinfektionen: HIV-positive Spender für HBV- und HCV-Assays (und umgekehrt)
Andere Hepatitisviren: Spender mit Antikörpern gegen HAV, HEV, HDV
Herpesviren: Spender mit Antikörpern gegen CMV, EBV, HSV-1/2, VZV
Atemwegserreger: Influenza A/B, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae
Sexuell übertragbar: Syphilis (Treponema pallidum), Chlamydia trachomatis, HSV-2
Tropisch: Malaria (Plasmodium-Antikörper und -Antigen), Toxoplasma gondii, Leishmania
Geimpfte Spender: Hepatitis-B-Impfung, MMR, Influenza
Schwangere Spenderinnen: 100–200 Schwangere (1., 2., 3. Trimenon)

Schilddrüsenassays (TSH, fT4, fT3, Anti-TPO, TRAK)

Schilddrüsenassays gehören zu den störanfälligsten Immunoassays der klinischen Chemie. Besondere Kreuzreaktivitätsthemen:

Heterophile Antikörper und HAMA – sehr häufige Ursache falsch-positiver TSH-Werte
Anti-TPO-positive Spender – für TSH- und fT4-Assays, bei denen Antikörperbindung die Messung der freien Hormone beeinflusst
TRAK-positive Spender – für die Störung von TSH-Assays durch TSH-Rezeptor-Antikörper
Anti-Tg-positiv – für Interferenztests bei Thyreoglobulin-Assays
Patienten mit Morbus Basedow und Hashimoto-Thyreoiditis – mit bestätigter klinischer Diagnose
Schwangerschaftsserum – die TSH-Suppression im ersten Trimenon ist physiologisch; der Assay muss sie von einer pathologischen Suppression unterscheiden
Biotin-Interferenz – besonders wichtig für Schilddrüsenassays auf Streptavidin-Biotin-Plattformen (TSH, fT4 auf Roche Elecsys)

Autoimmunassays (ANA, Anti-CCP, RF, dsDNA)

Gleichzeitige Autoimmunerkrankungen: SLE, rheumatoide Arthritis, Sjögren-Syndrom, Myasthenia gravis, primär biliäre Cholangitis – Overlap-Syndrome sind häufig
Infektiöse Auslöser: postinfektiöse ANA-Positivität – EBV, CMV, HCV können vorübergehend ANA induzieren
Alter und Geschlecht: Ältere weibliche Spender haben eine höhere Grundrate an ANA-Positivität
Medikamente: Einige Wirkstoffe (Hydralazin, Procainamid, Isoniazid) lösen einen medikamenteninduzierten Lupus mit ANA-Positivität aus – die Medikamentenanamnese sollte in den Spenderunterlagen dokumentiert sein

Herzmarker (Troponin, BNP, NT-proBNP, CK-MB)

HAMA – die wichtigste Störsubstanz für Troponin-Assays mit murinen Antikörpern
RF – hoher RF kann murine Antikörper verbrücken und falsch-positives Troponin erzeugen
Serum bei Niereninsuffizienz – erhöhtes Kreatinin (Troponin wird renal eliminiert – bei CKD auch ohne Herzschaden erhöht)
Skelettmuskelschaden: erhöhtes CK-MM und Myoglobin können CK-MB-Assays stören
Hämolyse: besonders wichtig für Troponin-I-Assays, die durch freigesetztes Hämoglobin gestört werden

Allergieassays (Gesamt-IgE, spezifisches IgE)

Polyklonale Hypergammaglobulinämie – erhöhte Gesamtimmunglobuline können ein falsch erhöhtes Gesamt-IgE erzeugen
Parasitäre Infektionen: Ascaris-, Toxocara-, Schistosoma-Infektionen verursachen eine polyklonale IgE-Erhöhung, die eine Allergie vortäuscht
Atopische Dermatitis: sehr hohes Gesamt-IgE (>5.000 IE/ml) – Tests zu Assaylinearität und Hook-Effekt
Gleichzeitige Autoimmunerkrankung: Bei einigen Autoimmunerkrankungen tritt ein IgE-Mangel auf

Den Beschaffungszeitplan für Kreuzreaktivitätsproben planen

Der häufigste Fehler ist, die Beschaffung der Kreuzreaktivitätspanels als Nebensache zu behandeln – etwas, das man erst nach dem Design der Sensitivitäts-/Spezifitätsstudie organisiert. In der Praxis haben manche Materialien lange Lieferzeiten:

Standardpanels (RF, ANA, lipämisch, ikterisch, hämolytisch): meist ab Lager verfügbar – 1–2 Wochen
Seltene positive Infektionsproben (Malaria, HTLV, Leishmanien): selten – 4–8 Wochen Lieferzeit
HAMA hoch positiv: ungewöhnlich – 2–4 Wochen
Medikamenteninduzierte Erkrankungen: erfordert Medikamentendokumentation – 4–8 Wochen
Schwangerschaftskohorten: erfordert koordinierte Gewinnung – 4–8 Wochen für trimesterspezifische Proben

Planen Sie die Beschaffung des Kreuzreaktivitätspanels im Studienzeitplan gleichzeitig mit Ihren Sensitivitäts-/Spezifitätspanels ein – nicht danach.

Praktische nächste Schritte

SeamlessBio liefert Disease-State-Serum und -Plasma für IVDR-Kreuzreaktivitätstests in allen wichtigen Diagnostikbereichen – Autoimmunität, Infektionen, Schilddrüse, Allergie, Diabetes, Onkologie und Drogenscreening. Es handelt sich um native humane Biomaterialien mit bestätigten Diagnosebefunden, vollständiger Spenderdokumentation und IVDR-Dokumentation auf Anfrage.

Kreuzreaktivität